RIPA裂解液

產(chǎn)品貨號：T16003

產(chǎn)品規(guī)格：100ml

保存條件：運輸4℃，長期保存-20℃

產(chǎn)品簡介：

    RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統(tǒng)的細胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白 樣品可以用于常規(guī)的Western、IP等。RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。本產(chǎn)品RIPA裂解液的主要成分為50mM Tris(pH7.4)，150mM NaCl，1% Triton X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS等。

操作步驟：

• 對于培養(yǎng)細胞樣品：

• 對于貼壁細胞，去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有  干擾，可以不洗)。按照每10⁷細胞加入200微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1-2秒后，細胞就會被裂解。
• 對于懸浮細胞，離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照每10⁷細胞加入200微升裂解液  的比例加入裂解液。用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，可適量添加裂解液。
• 充分裂解后，10000-14000rpm離心5-10分鐘，取上清，即可進行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

• 對于組織樣品：

• 把組織剪切成細小的碎片。
• 按照每20毫克組織加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添 加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。)
• 用玻璃勻漿器冰上勻漿，直至充分裂解。
• 充分裂解后，10000-14000rpm離心5-10分鐘，取上清，即可進行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
• 如果組織樣品本身非常細小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實驗。

注意事項 ：

• 裂解得到的蛋白樣品，由于含有較高濃度的去垢劑干擾，不能用Bradford法測定蛋白濃度，可以選用本公司生產(chǎn)的BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度。
• 用戶使用前可根據(jù)需要加入蛋白酶抑制劑如PMSF或者根據(jù)需要再加入leupeptin，aprotinin等其它抑制劑。
• 裂解液中SDS 4℃保存易沉淀析出，使用前應(yīng)該37℃-60℃水浴重新溶解*后回復(fù)到室溫使用。
• 裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或4℃進行。

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尚寶主營產(chǎn)品：

試劑盒

· 細胞活力/毒性檢測試劑盒

· 蛋白提取相關(guān)試劑盒

· 蛋白定量/濃度測定試劑盒

· 核酸純化/提取相關(guān)試劑盒

· 核酸檢測試劑盒

· 染色試劑盒

· 生化試劑盒檢測試劑盒

染色類

染色液     固定液    脫鈣液     染色輔助試劑     指示劑     

熒光染料

通用Buffer      常規(guī)溶液  

核酸類       蛋白與免疫   

生化試劑    病理常用染色試劑   

細胞類      細胞培養(yǎng)基 

標(biāo)準(zhǔn)品      ELISA 試劑盒   

DNA Marker   耗材

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