游離膽固醇(FC)檢測試劑盒(COD-PAP雙試劑比色法)

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1836

產(chǎn)品規(guī)格：100T

產(chǎn)品簡介：

膽固醇(Cholesterol)又稱膽甾醇，是一種環(huán)戊烷多氫菲的衍生物，廣泛存在于動(dòng)物體內(nèi)，其中腦、神經(jīng)組織豐富，在腎、脾、皮膚、肝和膽汁中含量也較高。用酶學(xué)方法測定游離膽固醇(FC)是生化檢測中的常用方法，其特點(diǎn)是：1、靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度均高；2、使用溫和的反應(yīng)條件；3、操作簡便；4、適用于自動(dòng)分析儀。

游離膽固醇(FC)檢測試劑盒(COD-PAP雙試劑比色法)又稱膽固醇氧化酶法或膽固醇氧化酶-過氧化物酶偶聯(lián)法等，血液中的膽固醇約1/3為游離膽固醇，2/3為與脂肪酸結(jié)合的膽固醇酯，后者被膽固醇酯酶(CEH)水解為游離膽固醇，游離膽固醇被膽固醇氧化酶(COD)氧化成膽甾烯酮，并產(chǎn)生過氧化氫，再經(jīng)過氧化物酶(POD)催化，使4-氨基安替比林與酚(三者合稱PAP)反應(yīng)，生成紅色醌亞胺色素(Trinder反應(yīng))，當(dāng)CEH不存在時(shí)，膽固醇酯不能被水解，因而只能檢測到游離膽固醇的含量，分光光度計(jì)在500~520nm處進(jìn)行比色測定。本試劑盒用于定量測定人或動(dòng)物的血清、血漿、腦脊液、細(xì)胞、組織等樣本中的游離膽固醇含量。本試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1. 生理鹽水或PBS

2. 離心管、小試管或96孔板

3. 水浴鍋或恒溫箱

4. 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀

5. 全自動(dòng)或半自動(dòng)生化分析儀

操作步驟(僅供參考):

1. 樣本處理：

①血清、血漿、腦脊液樣本：從待測樣本中分離出的血清或血漿不應(yīng)有溶血，直接檢測，如超過線性范圍，用生理鹽水稀釋后檢測。

②細(xì)胞樣本：

取適量的細(xì)胞(一般推薦>10以上)，1000g離心10min，棄上清，留取沉淀。

用PBS或生理鹽水清洗1~2次，1000g離心10min，棄上清，留取沉淀。

加入200~300μl的PBS或生理鹽水勻漿，冰浴條件下超聲破碎細(xì)胞，功率300W，每次3~5s，間隔30s，重復(fù)3~5 次。亦可手動(dòng)勻漿，制備好的勻漿液不可離心；亦可用1~2% Triton X-100冰浴30~60min，制備好的裂解液不可離心。

③組織樣本：準(zhǔn)確稱取適量組織樣本，按質(zhì)量(g)：生理鹽水或 PBS(ml)=1：9的比例，加入生理鹽水或PBS，冰浴條件下手動(dòng)或機(jī)械勻漿。2500~3000g離心10min，取上清。

2. FC測定

酶標(biāo)儀、全自動(dòng)生化分析儀FC測定

分光光度計(jì)(1ml比色杯)、半自動(dòng)生化分析儀FC測定

普通分光光度計(jì)(2ml比色杯)FC測定

①各種儀器按上表依次加入試劑。充分混勻, 37℃水浴中孵育5min。

②立即用相應(yīng)儀器測定500~520nm吸光度，以空白孔(管)調(diào)零，讀取標(biāo)準(zhǔn)孔(管)、測定孔(管)的吸光度，分別記為 A標(biāo)準(zhǔn)、A測定。

機(jī)器參數(shù)：

計(jì)算公式： 

血清、血漿等液體樣本(空白調(diào)零)：

FC(mmol/L)= A測定/A標(biāo)準(zhǔn)×5

血清、血漿等液體樣本(全自動(dòng)生化分析儀)：

FC(mmol/L)= (A測定- A空白)/(A標(biāo)準(zhǔn)- A空白)×5

組織樣本(空白調(diào)零)：

FC(mmol/g)= A測定/A標(biāo)準(zhǔn)×5×V2/(m×1000)

組織樣本(全自動(dòng)生化分析儀)：

FC(mmol/g)= (A測定- A空白)/(A標(biāo)準(zhǔn)- A空白)×5×V/(m×1000)

細(xì)胞樣本(空白調(diào)零)：

FC(mmol/L)= A測定/A標(biāo)準(zhǔn)×5×V2/V1

細(xì)胞樣本(全自動(dòng)生化分析儀)：

FC(mmol/L)= (A測定- A空白)/(A標(biāo)準(zhǔn)- A空白)×5×V2/V1

式中：m=組織樣本取樣量（g）

V1=細(xì)胞樣本取樣量（ml）

V2=樣本勻漿液總體積（ml）

參考區(qū)間： 

【FC標(biāo)準(zhǔn)(5mmol/L)=442.48mg/dl】

健康成年人理想范圍：<1.7mmol/L(<67mg/dl)

性能指標(biāo)：

注意事項(xiàng)：

1. 上述低溫試劑避免反復(fù)凍融，以免失效或效率下降。

2. COD-PAP工作液如不經(jīng)常使用，應(yīng)充分溶解后分裝-20℃保存，可4℃短期保存。

3. 本法可直接用于檢測腦脊液中的FC含量，但不能直接檢測尿液中的FC含量，因?yàn)槲唇?jīng)處理的尿液中含有還原性物質(zhì)，影響過氧化物酶反應(yīng)。

4. 檢測FC的血清或血漿宜用EDTA或肝素抗凝，如不能及時(shí)測定，密閉保存，4℃可穩(wěn)定一周，-20℃可以穩(wěn)定半年以上。

5. 本法線性范圍可達(dá)13mmol/L，如果樣本FC濃度過高，結(jié)果可能呈假性降低，應(yīng)用生理鹽水稀釋后重測，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。

6. 本試劑盒既可作終點(diǎn)法檢測，又可作速率法檢測。

7. 本法不適于檢測總膽固醇的濃度，如需檢測總膽固醇(TC)含量，請(qǐng)選擇相關(guān)產(chǎn)品。

有效期：6個(gè)月有效。4℃運(yùn)輸，-20℃保存。