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植物過氧化物酶(POD)檢測試劑盒(愈創(chuàng)木酚比色法)
產(chǎn)品貨號:BA1775
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品簡介:
過氧化物酶(peroxisome,POD)是以過氧化氫為電子受體催化底物氧化的酶,主要存在于細(xì)胞的過氧化物酶體中,以鐵卟啉為輔基,可催化過氧化氫,氧化酚類和胺類化合物,具有消除過氧化氫和酚類、胺類毒性的雙重作用,該酶屬于細(xì)胞木質(zhì)素合成途徑中間的關(guān)鍵酶,研究該酶可以探討多種生物細(xì)胞發(fā)育過程中木質(zhì)素沉積的代謝機理,為減少水果石細(xì)胞含量提高其品質(zhì)提供依據(jù)。
植物過氧化物酶(POD)檢測試劑盒(愈創(chuàng)木酚比色法)檢測原理是以愈創(chuàng)木酚(又稱2-甲氧基酚)作為底物,在酶促反應(yīng)的最適條件下采用每隔一定時間測定產(chǎn)物生成量的方法,于分光光度計470nm處測定吸光度,以吸光度變化所需酶量進(jìn)行計算,該試劑盒主要用于植物組織的裂解液或勻漿液、血清等樣品中內(nèi)源性的過氧化物酶活性,尤其適用于測定水果中過氧化物酶活性。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,不宜用于臨床診斷或其他用途。
產(chǎn)品組成:
試劑名稱 | 50T | 保存條件 |
試劑(A): POD Lysis buffer | 250ml | 2-8℃ |
試劑(B): POD Assay buffer | 100ml | 2-8℃,避光 |
試劑(C): POD 氧化劑 | 4ml | 2-8℃ |
自備材料:
1. 蒸餾水
2. 研缽或勻漿器
3. 離心管
4. 低溫離心機
5. 水浴鍋或恒溫箱
6. 分光光度計、比色杯
操作步驟:
1. 準(zhǔn)備樣品:
①植物樣品:取2g植物組織或水果中層果肉加入4ml預(yù)冷的POD Lysis buffer研磨或勻漿,4℃ 10000g離心15~20min,留取上清液,即為POD粗提液,-20℃凍存,用于過氧化物酶的測定。
②血漿、血清和尿液樣品:血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定,-20℃凍存,用于過氧化物酶的測定。
③細(xì)胞或組織樣品:取恰當(dāng)細(xì)胞或組織裂解液,如有必要用POD Lysis buffer進(jìn)行適當(dāng)勻漿,4℃ 10000g離心 15~20min,留取上清液,即為POD粗提液,-20℃凍存,用于過氧化物酶的測定。
④高活性樣品:如果樣品中含有較高活性的過氧化物酶,可以使用POD Lysis buffer進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>
2. 配制POD Assay buffer工作液:取適量的POD氧化劑和POD Assay buffer,按POD氧化劑:POD Assay buffer=1:14混合,即為POD Assay buffer工作液,即配即用,不宜久置。
3. POD加樣:按照下表設(shè)置對照管、測定管,注意:對照管、測定管中為同一待測樣品,但對照管中為提前加熱煮沸5min的樣品。溶液應(yīng)按照順序依次加入,并注意避免產(chǎn)生氣泡,如果樣品中的POD活性過高,可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定,樣品的檢測最好能設(shè)置2平行管,求平均值。
加入物(ml) | 對照管 | 測定管 |
待測樣品 | 0.05(提前煮沸5min) | 0.05 |
POD Lysis buffer | 1.45 | 1.45 |
POD Assay buffer工作液 | 1 | 1 |
4. POD測定:以對照管為對照(調(diào)零),比色杯光徑1.0cm,立即分光光度計測定470nm處測定管的吸光度(記為A測定 0 )。
計算:
POD活性單位的定義:在該實驗條件下,每1min吸光度變化0.01所需酶量為一個活性單位。
組織樣本 POD(U)={(A測定1 -A測定0 )×V T }/(W×V S ×0.01×t)
式中:A測定1 =孵育3min后測定管的吸光度
A測定0 =加入POD Assay buffer工作液后立即測定管的吸光度
W=組織樣本的重量(g)
V T =提取酶液的總體積(ml)
V S =測定時所用酶液體積(ml)
t=反應(yīng)時間(min)=3
液體樣本 POD(U)=(A測定1 -A測定0 )/(0.01×t)
式中:A測定1 =孵育3min后測定孔的吸光度值
A測定0 =加入POD Assay buffer工作液后立即測定的測定孔吸光度值
t=反應(yīng)時間(min)=3
注意事項:
1. 待測樣品中不能含有酶抑制劑,同時需避免反復(fù)凍融。
2. POD酶液提取時,注意低溫操作,防止酶活性。
3. 以煮沸的酶液為對照時,酶要充分失活。
4. POD氧化劑具有一定腐蝕性,請小心操作。
5. POD氧化劑易揮發(fā),請密閉保存,否則檢測效率下降。
6. 如果沒有分光光度計,也可以使用普通的酶標(biāo)儀測定,每次檢測指標(biāo)不宜過多,否則操作時間不一,有可能導(dǎo)致樣本間的差異。
7. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
有效期: 6個月有效。常溫運輸,4℃保存。
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