碘化丙啶PI染色液在某些特定情況下可用于檢測細(xì)胞凋亡、普通核染色和雙鏈DNA染色。染色后可用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測，碘化丙啶是一種DNA結(jié)合染料。其激發(fā)和發(fā)射波長分別為488nm和630nm。它產(chǎn)生紅色熒光，但沒有膜通透性，不能穿透活細(xì)胞膜。它只能染色死細(xì)胞。因此，在熒光顯微鏡下，正常細(xì)胞不能著色，早期凋亡細(xì)胞呈弱紅光，晚期凋亡細(xì)胞呈強(qiáng)紅光，壞死細(xì)胞呈強(qiáng)紅色熒光。流式細(xì)胞儀還可用于分析細(xì)胞形態(tài)變化對光散射特性的影響，也可與RNaseA結(jié)合進(jìn)行細(xì)胞周期分析。
碘化丙啶PI染色液染色步驟：
1、用PBS或適當(dāng)?shù)木彌_液制備10-50MPI溶液。
2、向細(xì)胞培養(yǎng)物中加入1/10細(xì)胞培養(yǎng)基體積的PI溶液。
3、將細(xì)胞在37C下孵育10-20分鐘。
4、用PBS或適當(dāng)?shù)木彌_液清洗細(xì)胞兩次。
5、用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。激發(fā)波長為535nm，激發(fā)波長為617nm。
碘化丙啶PI染色液在多色熒光中的應(yīng)用：碘化丙啶(PI)是一種細(xì)胞不可滲透的核酸包埋染料。由于Pi被排除在活細(xì)胞之外，它通常用于選擇性地染色混合的活細(xì)胞和死細(xì)胞群中的死細(xì)胞。
PI用作紅色熒光核酸染料；PI與核酸結(jié)合后熒光增強(qiáng)20～30倍；PI在所有類型的細(xì)胞中都具有死細(xì)胞特異性，包括哺乳動物細(xì)胞、細(xì)菌和酵母；PI與流式細(xì)胞術(shù)和熒光顯微鏡兼容。PI進(jìn)入細(xì)胞與DNA和RNA結(jié)合后，熒光增強(qiáng)20～30倍。PI可用于流式細(xì)胞術(shù)和熒光顯微鏡。PI也可用作多色熒光成像的雙染色，但核特異性染色需要消化細(xì)胞RNA。
