詳細介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
胰腺 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 上皮細胞樣 | YS-01X8471 |
細胞簡介:
兔胰腺導管上皮分離自胰腺組織;胰腺分為外分泌腺和內(nèi)分泌腺兩部分。外分泌腺由腺泡和腺管組成,腺泡分泌胰液,腺管是胰液排出的通道。胰液中含有、原、脂肪酶。胰液通過胰腺管排入十二指腸,有消化蛋白質(zhì)、脂肪和糖的作用。內(nèi)分泌腺由大小不同的細胞團──胰島所組成,胰島主要由4種細胞組成:α細胞、β細胞、γ細胞及PP細胞。α細胞分泌胰高血糖素,升高血糖;β細胞分泌胰島素,降低血糖;γ細胞分泌,以旁分泌的方式抑制α、β細胞的分泌;PP細胞分泌胰多肽,抑制胃腸運動、胰液分泌和膽囊收縮。成體胰腺導管上皮細胞作為胰腺前體細胞,已證實具多向分化潛能,在合適的外源性刺激下可分化成胰島樣細胞,胰腺導管上皮細胞轉(zhuǎn)分化的胰島樣細胞免疫原性如何,轉(zhuǎn)分化的胰島樣細胞在治療糖尿病時是否發(fā)生免疫排斥反應(yīng),對干細胞臨床治療糖尿病具有重要意義。
原代細胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,漂?。?/p>
7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,應(yīng)將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行;
3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進行分瓶試驗;
4、長期培養(yǎng)時,淋巴細胞中要加入生長因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,以利細胞生長;
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行。
方法簡介:
實驗室分離的兔胰腺導管上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合密度梯度離心法、差速貼壁法,并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
實驗室分離的兔胰腺導管上皮經(jīng)Cytokeratin-19免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
包被條件:鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):上皮細胞樣
傳代特性:可傳1-2代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔胰腺導管上皮體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
兔去甲上腺素試劑盒 兔去甲上腺素試劑盒 兔去甲上腺素試劑盒,,來源:試劑盒(進口分裝),產(chǎn)品別名:兔去甲上腺素試劑盒、兔去甲上腺素試劑盒
兔前列腺素F2a試劑盒 兔前列腺素F2a試劑盒 兔前列腺素F2a試劑盒,,來源:試劑盒(進口分裝),產(chǎn)品別名:兔前列腺素F2a試劑盒、兔前列腺素F2a 試劑盒
兔前列腺素E2試劑盒 兔前列腺素E2試劑盒 兔前列腺素E2試劑盒,,來源:試劑盒(進口分裝),產(chǎn)品別名:兔前列腺素E2試劑盒、兔前列腺素E2 試劑盒
兔前列腺素E1試劑盒 兔前列腺素E1試劑盒 兔前列腺素E1試劑盒,,來源:試劑盒(進口分裝),產(chǎn)品別名:兔前列腺素E1試劑盒、兔前列腺素E1 試劑盒
核糖核酸酶3/Drosha抗體
糖基轉(zhuǎn)移酶28家族1抗體
FGFR3重組小鼠 FGFR3 / CD333 蛋白 Protein
CD272/BTLA(B and T lymphocyte attenuator 0.5mgCD272/BTLA(B and T lymphocyte attenuator) B 和 T 淋巴細胞衰減蛋白(抗原)
VSTM1重組人 VSTM1 蛋白 (Fc 標簽) Protein
HGF Protein Human 重組人 HGF / Hepatocyte Growth Factor 蛋白
PDCD1LG2 Protein Rat 重組僀?僀
CD272/BTLA(B and T lymphocyte attenuator 0.5mgCD272/BTLA(B and T lymphocyte attenuator) B 和 T 淋巴細胞衰減蛋白(抗原)
HGF Protein Human 重組人 HGF / Hepatocyte Growth Factor 蛋白
FGFR3重組小鼠 FGFR3 / CD333 蛋白 Protein
PDCD1LG2 Protein Rat 重組大鼠 B7-DC / PD-L2 / CD273 蛋白
VSTM1重組人 VSTM1 蛋白 (Fc 標簽) Protein
小鼠P53(P53-ab)ELISA pcr檢測試劑盒
Rat glycogen syhase kinase (GSK) ELISA Kit 大鼠糖原合成酶激酶(GSK)試劑盒
HumanEsiol,E3ELISAKit 人雌三醇(E3)pcr檢測試劑盒分裝
HumancoagulationfactorⅨ,FⅨ試劑盒人Ⅸ(FⅨ)試劑盒規(guī)格:96T/48T
組蛋白脫乙?;?span>9(HDAC9)活性比色法定量試劑盒20次
humaesistinELISAKit人抵抗素(Resistin)試劑盒規(guī)格:96T/48T
兔胰腺導管上皮細胞大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β3(TGFβ3)試劑盒 ,英文名: TGFβ3 ELISA Kit
Mouse ai cardiolipin aibody IgG (ACA-IgG) ELISA Kit 小鼠抗心0脂抗體IgG(ACA-IgG)試劑盒
Mousekeratinocyteaocrinefactor/Amphiregulin,KAF/ARELISAKit 小鼠角化細胞內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)pcr檢測試劑盒分裝
CLIAKitforHumanLactoferrin,LTF/LFELISAkit人乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白
微粒體S轉(zhuǎn)移酶(GSHST)活性比色法定量試劑盒20次
大鼠抗IVIgG抗體ELISAKit大鼠抗IVIgG抗體ELISAKit,大鼠抗IVIgG抗體ELISAKit,