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          上海莼試生物技術(shù)有限公司>供求商機(jī)>50T-線頸*線蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒
          50T-線頸*線蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒
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          • 50T-線頸*線蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒

          舉報(bào)
          貨物所在地: 上海上海市
          產(chǎn)地: 進(jìn)口、國產(chǎn)
          更新時(shí)間: 2024-09-15 21:00:06
          期: 2024年9月15日--2025年3月15日
          已獲點(diǎn)擊: 27
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          (聯(lián)系我們,請說明是在 化工儀器網(wǎng) 上看到的信息,謝謝!)

          產(chǎn)品簡介

          線頸*線蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品, 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強(qiáng)劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分,用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng),具有廣泛的用途。

          詳細(xì)介紹

          產(chǎn)品名稱

          線頸*線蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒

          英文名稱

          Nematodirus filicollis

          貨號

          CP934521

          產(chǎn)品特征:

          線頸*線蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒靈敏度高:能對低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量。
          特異性強(qiáng):采用熱啟動(dòng)酶的激活機(jī)制,抑制非特異性擴(kuò)增 。
          重復(fù)性好:擴(kuò)增曲線重合度高,受干擾影響少。
          擴(kuò)增效率高:擴(kuò)增曲線Ct值低,起峰快,效率高。
          原理:
          所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。產(chǎn)品僅用于科研
          檢測方法:
          1.Ⅰ法:
          在PCR反應(yīng)體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
          定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
          PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
          2.TaqMan探針法:
          探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收;PCR擴(kuò)增時(shí),Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
          熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
          ①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
          ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
          ③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
          ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。
          ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
          ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
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          需要自備的器材:

          1.儀器:分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器(2 µL、20µL、200 µL、1000 µL)。
          2.耗材:熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水
          處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。
          具有下列特點(diǎn):
          1.即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單,定量準(zhǔn)確快速。
          2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
          3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
          4. 提供陽性對照,便于分析試驗(yàn)結(jié)果。產(chǎn)品僅用于科研

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