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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
鐮刀菌通用探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強(qiáng)劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng)，具有廣泛的用途。
詳細(xì)介紹
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Fusarium spp. |
貨號(hào) | CP934265 |
產(chǎn)品特征:
鐮刀菌通用探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒靈敏度高：能對(duì)低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量。
特異性強(qiáng)：采用熱啟動(dòng)酶的激活機(jī)制，抑制非特異性擴(kuò)增 。
重復(fù)性好：擴(kuò)增曲線重合度高，受干擾影響少。
擴(kuò)增效率高：擴(kuò)增曲線Ct值低，起峰快，效率高。
原理:
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。產(chǎn)品僅用于科研
檢測(cè)方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號(hào)，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào)，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
以下是鐮刀菌通用探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
3--5-硝基苯酸組織谷氨酸草酰酸轉(zhuǎn)氨酶（GOT）活性光譜法定量檢測(cè)試盒
4-氟-2-基苯血液谷氨酸草酰酸轉(zhuǎn)氨酶（GOT）活性光譜法定量檢測(cè)試盒
4-(叔基)-2-硝基苯胺體液谷氨酸草酰酸轉(zhuǎn)氨酶（GOT）活性光譜法定量檢測(cè)試盒
6-煙酸膽酯酶（CHE）活性比色法定量檢測(cè)試盒
4-氟苯酰酸酯酰膽酯酶活性比色法定量檢測(cè)試盒
4--3-硝基苯酸通用型酰膽酯酶活性比色法定量檢測(cè)試盒
2,4-二吡咯[3,2-D]嘧啶細(xì)胞酰膽酯酶活性比色法定量檢測(cè)試盒
5-氨基-1H-吡唑-3-羧酸酯組織酰膽酯酶活性比色法定量檢測(cè)試盒
鐮刀菌通用探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒羥基磺酸鈉血液酰膽酯酶活性比色法定量檢測(cè)試盒
1-Boc-4-氨基哌啶體液酰膽酯酶活性比色法定量檢測(cè)試盒
3-羥基苯硼酸頻哪醇酯通用型酰膽酯酶活性熒光定量檢測(cè)試盒
2--5-三氟基苯胺細(xì)胞酰膽酯酶活性熒光定量檢測(cè)試盒
2-基己酸組織酰膽酯酶活性熒光定量檢測(cè)試盒
3-羥基四呋喃血液酰膽酯酶活性熒光定量檢測(cè)試盒
氟酸酯體液酰膽酯酶活性熒光定量檢測(cè)試盒電泳級(jí)耐熱型SYBR染料SuperSYBR，EG常溫閉光50uL
電泳級(jí)叉雙烯酰胺 Bis-Acrylamide，EG常溫，防潮25g
電泳級(jí)過硫酸銨Ammonium Persulfate，EG常溫，防潮0.1g×10
電泳級(jí)甘油Glycerol，EG常溫100mL
電泳級(jí)二苯藍(lán)FF溶液Xylene Cyanol Solution，EG常溫密封干燥避光保存10mL
電泳級(jí)橙黃G溶液Orange G Solution，EG常溫，避光干燥保存10mL
電泳級(jí)烯酰胺溶液(干粉型)Acrylamide Solution（19:1Po`wder）,EG常溫200mL
電泳級(jí)TEMEDTEMED，EG4℃保存（長(zhǎng)期保存可放-20℃）、避光1.5mL
電泳級(jí)SYBR Green ISYBR GreenⅠ, EG-20℃保存50uL
電泳級(jí)MOPSMOPS，EG常溫100g
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器（2 µL、20µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管、吸頭（10 µL、200 µL、1000 µL）、滅菌雙蒸水。
具有下列特點(diǎn)：
1.即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡(jiǎn)單，定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化，特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對(duì)照，便于分析試驗(yàn)結(jié)果。產(chǎn)品僅用于科研