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產(chǎn)品簡介
貓衣原體探針法熒光定量PCR檢測試劑盒所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
詳細(xì)介紹
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Chlamydia felis |
貨號(hào) | CP934056 |
儲(chǔ)存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
探針法：
貓衣原體探針法熒光定量PCR檢測試劑盒aqMan 探針是一種寡核苷酸探針，它的熒光與目的序列的擴(kuò)增相關(guān)。它與目標(biāo)序列上游引物和下游引物之間的序列配對(duì)。熒光基團(tuán)連接在探針的5’ 末端，而淬滅劑則在3’ 末端。當(dāng)完整的探針與目標(biāo)序列配對(duì)時(shí)，熒光基團(tuán)發(fā)射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進(jìn)行延伸反應(yīng)時(shí)，聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進(jìn)行酶切，使得熒光基團(tuán)與淬滅劑分離。隨著擴(kuò)增循環(huán)數(shù)的增加，釋放出來的熒光基團(tuán)不斷積累。因此熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系。相對(duì)于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準(zhǔn)確性。
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對(duì)照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽性對(duì)照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2和1號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對(duì)照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號(hào)管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照。
5. 換槍頭，從6號(hào)管中取5 μL溶液到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對(duì)照。
6. 換槍頭，從5號(hào)管中取5 μL溶液到4號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。
7. NC管中不加任何陽性對(duì)照。
8. 從1-6號(hào)管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步），每個(gè)樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個(gè)陽性對(duì)照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：
應(yīng)用案例：
樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級(jí)版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝（一管式病毒 DNAout 的成分）。
稀釋陽性對(duì)照（以 10E2-10E7 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照，只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DN段作為陽性對(duì)照。
2.標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4.在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對(duì)照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。5.換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
6.換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
7.換槍頭，在 4 號(hào)管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 4 號(hào)管中，得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用
8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20 μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9.在 PCR 管中加入下列成分。
以下是公司正在*的產(chǎn)品：
(4-氧基苯基)(4-哌啶)酮鹽酸鹽人免疫球蛋白E Fc段受體Ⅱ(FcεRⅡ/CD23)ELISA Kit，48T/96T
苯酰胺肟人免疫球蛋白A Fc段受體Ⅰ(FcαRⅠ/CD89)ELISA Kit，48T/96T
3-氰基-2,6-二-4-(三氟基)吡啶人巨噬細(xì)胞活化因子(MAF)ELISA Kit，48T/96T
2-基喹喔啉人T細(xì)胞生長因子-Ⅲ(TCGF-Ⅲ)ELISA Kit，48T/96T
2,6-二氨基-4,5,6,7-四苯并噻唑人β2整合素(integrin β2/CD11+CD18)ELISA Kit，48T/96T
3--5-碘苯酸人整合素連接激酶1(ILK-1)ELISA Kit，48T/96T
L-賴氨酸二異氰酸酯人銜接蛋白酶活化因子1(APAF1)ELISA Kit，48T/96T
Enterobacter cancerogenus楊樹枯萎病菌PCR試劑盒
Erwinia amylovora梨火疫病菌PCR試劑盒
Erwinia ananas鳳梨歐文氏菌PCR試劑盒
erwinia carotovora subsp atroseptica胡蘿卜軟腐歐文氏菌馬鈴薯黑脛亞種PCR試劑盒
erwinia carotovora subsp carotovora胡蘿卜軟腐歐文氏菌胡蘿卜亞種PCR試劑盒
Erwinia chrysanthemi pv. dianthicola菊歐文氏菌香石竹致病變種PCR試劑盒
Erwinia chrysanthemi pv. parthenii菊歐文氏菌銀膠菊致病變種PCR試劑盒
Erwinia chrysanthemi pv. zeae菊歐文氏菌玉米致病變種PCR試劑盒
Erwinia chrysanthemi菊基腐病菌PCR試劑盒
Erwinia cypripedii勺蘭歐文氏菌PCR試劑盒
Erwinia pyrifoliae亞洲梨火疫病菌PCR試劑盒
Eutypa lata葡萄藤猝倒病菌PCR試劑盒
Freesia Mosaic Virus(FreMV)小蒼蘭花葉病毒PCR試劑盒
Fusarium circinatum松樹脂潰瘍病菌PCR試劑盒
Fusarium culmorum黃色鐮刀菌PCR試劑盒
Fusarium graminearum禾谷鐮刀菌PCR試劑盒
Fusarium oxysporum Schlecht. f.sp. apii芹菜枯萎病菌PCR試劑盒
Fusarium oxysporum Schlecht. f.sp. asparagi蘆筍枯萎病菌PCR試劑盒
Fusarium oxysporum Schlecht. f.sp. cubense香蕉枯萎病菌PCR試劑盒
Fusarium oxysporum Schlecht. f.sp. elaeidis Toovey油棕枯萎病菌PCR試劑盒
Fusarium oxysporum Schlecht. f.sp. fragariae草莓枯萎病菌PCR試劑盒
Fusarium tucumaniae南美大豆猝死綜合癥病菌PCR試劑盒
Fusarium virguliforme北美大豆猝死綜合癥病菌PCR試劑盒
Gaeumannomyces graminis燕麥全蝕病菌PCR試劑盒
貓衣原體探針法熒光定量PCR檢測試劑盒2'-氧基肉桂醛人酯酶C(PLC)ELISA Kit，48T/96T B3GALNT1 β1，3半乳糖轉(zhuǎn)移酶3抗體十七碳酸酯
B MyB 轉(zhuǎn)錄因子MYB相關(guān)蛋白B抗體槐角苷
Azurocidin/Cationic antimicrobial protein 37 肝素結(jié)合蛋白/陽離子抗菌蛋白37/天青殺素抗體蓮心堿高酸鹽
AXUD1 轉(zhuǎn)化生長因子β誘導(dǎo)蛋白3抗體（半胱氨酸和絲氨酸富含核蛋白1）鴨腳樹葉堿
AXL/UFO 粘附相關(guān)激酶抗體異阿魏酸
Axin1 軸蛋白1抗體高良姜素
Axin 2 軸抑制蛋白2抗體梣酮
AX2R/LOC389289 膜粘連蛋白2受體抗體白楊素
AVPR2 精氨酸加壓素受體2抗體芥子堿硫氰酸鹽
AVEN 細(xì)胞死亡調(diào)節(jié)蛋白抗體(凋亡、半胱胺酸蛋白酶激活抑制)芒柄花素
AUTS2 孤獨(dú)癥易感基因2蛋白抗體（自閉癥相關(guān)蛋白1）染料木素
Aurora C 有絲分裂激酶B抗體(-)-薄荷酮
Aurora B/STK-1 有絲分裂激酶B抗體胡薄荷酮
Aurora A/B/C 有絲分裂激酶A/B/C抗體薯蕷皂苷
Aurora A/ARK-1/AURKA 有絲分裂激酶A抗體鷹嘴豆芽素A