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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
伯克氏菌通用探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強(qiáng)劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng)，具有廣泛的用途。
詳細(xì)介紹
產(chǎn)品特征:
靈敏度高：能對(duì)低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量。
特異性強(qiáng)：采用熱啟動(dòng)酶的激活機(jī)制，抑制非特異性擴(kuò)增 。
重復(fù)性好：擴(kuò)增曲線重合度高，受干擾影響少。
擴(kuò)增效率高：擴(kuò)增曲線Ct值低，起峰快，效率高。
原理:
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。產(chǎn)品僅用于科研
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Burkholderia spp. |
貨號(hào) | CP934009 |
伯克氏菌通用探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
檢測(cè)方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中，加入過(guò)量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號(hào)，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào)，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時(shí)，產(chǎn)品僅用于科研報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器（2 µL、20µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管、吸頭（10 µL、200 µL、1000 µL）、滅菌雙蒸水。
具有下列特點(diǎn)：
1.即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡(jiǎn)單，定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過(guò)優(yōu)化，特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于分析試驗(yàn)結(jié)果。
以下是伯克氏菌通用探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
三氨喋啶相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品大鼠P53(P53)ELISA Kit，48T/96T
三氨喋啶相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品兔p53(p53)ELISA Kit，48T/96T
檸檬酸三酯標(biāo)準(zhǔn)品人視黃醇結(jié)合蛋白4(RBP-4)ELISA Kit，48T/96T
三正基氧化標(biāo)準(zhǔn)品小鼠視黃醇結(jié)合蛋白4(RBP-4)ELISA Kit，48T/96T
百蟲標(biāo)準(zhǔn)品大鼠視黃醇結(jié)合蛋白4(RBP-4)ELISA Kit，48T/96T
三噻嗪標(biāo)準(zhǔn)品兔子視黃醇結(jié)合蛋白4(RBP-4)ELISA Kit，48T/96T
三生標(biāo)準(zhǔn)品人酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(pERK)ELISA Kit，48T/96T
三生相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品小鼠酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(pERK)ELISA Kit，48T/96T
曲地銨標(biāo)準(zhǔn)品豬酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(pERK)ELISA Kit，48T/96T
鹽酸三烯四胺標(biāo)準(zhǔn)品大鼠酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(pERK)ELISA Kit，48T/96T
伯克氏菌通用探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒檸檬酸三酯標(biāo)準(zhǔn)品人酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA Kit，48T/96T
鹽酸三氟拉嗪標(biāo)準(zhǔn)品小鼠酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA Kit，48T/96T
2-[N-(2,2,2-三氟基)氨基-5]-苯酮標(biāo)準(zhǔn)品大鼠酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA Kit，48T/96T
鹽酸三氟嗪標(biāo)準(zhǔn)品人孤腓肽(OFQ/N)ELISA Kit，48T/96T
曲氟胸苷標(biāo)準(zhǔn)品小鼠孤腓肽(OFQ/N)ELISA Kit，48T/96T CCR-1 細(xì)胞表面趨化因子受體1抗體萘普生
CCP 瓜氨酸環(huán)肽抗體潑尼松
CCNYL1 周期素樣Y1抗體青蒿琥酯
CCNDBP1/GCIP 周期素D結(jié)合蛋白1抗體酸右美沙芬
ccnb1ip1 周期蛋白B1結(jié)合蛋白1抗體舒必利
CCL9/CCL10/MIP-1 gamma/SCYA10 巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-1γ抗體沙胺醇
CCL6/C10 嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白CCL6抗體雙氰胺
CCL5/RANTES T細(xì)胞特異性趨化因子抗體水楊酸鎂
CCL4/MIP-1 Beta 巨噬細(xì)胞炎性蛋白1β抗體司坦唑醇
CCL3/MIP 1α 巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α抗體苯妥英鈉
CCL28/MEC 粘膜相關(guān)上皮趨化因子28抗體辛可尼
CCL27/CTACK 皮膚T細(xì)胞虜獲趨化因子抗體貝那替嗪
CCL26/Eotaxin 3 嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白3抗體鹽酸安他唑啉
CCL25/TECK 胸腺表達(dá)趨化因子抗體鹽酸苯醇胺
CCL24 嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白24抗體鹽酸美西律