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產(chǎn)品簡介
犬輪狀病毒探針法熒光定量PCR檢測試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強(qiáng)劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng)，具有廣泛的用途。
詳細(xì)介紹
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Canine Rotavirus（CRV） |
貨號 | CP934036 |
產(chǎn)品特征:
犬輪狀病毒探針法熒光定量PCR檢測試劑盒靈敏度高：能對低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量。
特異性強(qiáng)：采用熱啟動酶的激活機(jī)制，抑制非特異性擴(kuò)增 。
重復(fù)性好：擴(kuò)增曲線重合度高，受干擾影響少。
擴(kuò)增效率高：擴(kuò)增曲線Ct值低，起峰快，效率高。
原理:
所謂實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。產(chǎn)品僅用于科研
檢測方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
以下是犬輪狀病毒探針法熒光定量PCR檢測試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
單氟酸鈉鯉魚卵黃蛋白原(VTG)ELISA Kit，48T/96T
4-氟-3-基苯硼酸人不對稱二基精氨酸(ADMA)ELISA Kit，48T/96T
7-硝基喹唑啉-2,4-二酮人Agouti相關(guān)蛋白(AGRP)ELISA Kit，48T/96T
4--2-羥基苯酸酯人聚集蛋白(Agrin)ELISA Kit，48T/96T
4,4-二氟庚二酸二酯人補(bǔ)體片斷5b(C5b)ELISA Kit，48T/96T
無水化鍶人補(bǔ)體片斷4b(C4b)ELISA Kit，48T/96T
二苯基氧人補(bǔ)體片斷3b(C3b)ELISA Kit，48T/96T
硅化鎂人血纖肽/纖維蛋白肽B(FPB)ELISA Kit，48T/96T
2-氧基基吡啶人尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA/PLAU)ELISA Kit，48T/96T
3-氟-4-碘硝基苯人多效生長因子(PTN)ELISA Kit，48T/96T
4-氟-2-碘-1-基苯人多形核白細(xì)胞彈性蛋白酶(PMN Elastase)ELISA Kit，48T/96T
犬輪狀病毒探針法熒光定量PCR檢測試劑盒2-氨基-5-噻唑-4-酸酯人阿黑皮素原(POMC)ELISA Kit，48T/96T
(R)-4-苯基-2-唑烷酮人分泌性白細(xì)胞蛋白酶抑制因子(SLPI)ELISA Kit，48T/96T
己烯雌酚人型肝炎病X蛋白相互作用蛋白(HBXIP)ELISA Kit，48T/96T
N-基-N-基苯酰胺人腺相關(guān)病(AAV)ELISA Kit，48T/96T C17orf49 17號染色體開放閱讀框49抗體羊藿苷
C17orf42 17號染色體開放閱讀框42抗體異補(bǔ)骨脂素
C17ORF39 17號染色體開放閱讀框39抗體補(bǔ)骨脂素
C17orf104 17號染色體開放閱讀框104抗體秦皮素
C16orf7/ATP-BL 16號染色體開放閱讀框7抗體秦皮素
C16orf61 16號染色體開放閱讀框61抗體熊果酸
C16orf57 16號染色體開放閱讀框57抗體冰片
C16orf48 16號染色體開放閱讀框48抗體菝契皂苷元
C15orf62 15號染色體開放閱讀框62抗體三七皂苷R1
C15orf52 15號染色體開放閱讀框52抗體馬兜鈴酸A
C15orf41 15號染色體開放閱讀框41抗體樟腦
C14ORF140/FAM164C 14號染色體開放閱讀框140抗體α-香附酮
C13orf38/LOC728591 13號染色體開放閱讀框38抗體梔子苷
C12ORF68 12號染色體開放閱讀框68抗體貝母素
C12ORF63 12號染色體開放閱讀框63抗體貝母素
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器（2 µL、20µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管、吸頭（10 µL、200 µL、1000 µL）、滅菌雙蒸水。
具有下列特點(diǎn)：
1.即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡單，定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化，特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照，便于分析試驗(yàn)結(jié)果。產(chǎn)品僅用于科研