詳細(xì)介紹
需要自備的器材:
1.儀器:分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器(2 µL、20µL、200 µL、1000 µL)。
2.耗材:熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水
處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。
具有下列特點(diǎn):
1.即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單,定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照,便于分析試驗(yàn)結(jié)果。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 | Abalone Herpes-like Virus(AbHV) | CP933840 |
產(chǎn)品特征:
鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量PCR檢測試劑盒靈敏度高:能對低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量。
特異性強(qiáng):采用熱啟動酶的激活機(jī)制,抑制非特異性擴(kuò)增 。
重復(fù)性好:擴(kuò)增曲線重合度高,受干擾影響少。
擴(kuò)增效率高:擴(kuò)增曲線Ct值低,起峰快,效率高。
原理:
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
檢測方法:
1.Ⅰ法:
在PCR反應(yīng)體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法:
探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收;PCR擴(kuò)增時(shí),Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
以下是鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量PCR檢測試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品:
構(gòu)巢曲霉探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 Aspergillus nidulans
赭曲霉探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 Aspergillus ochraceus
寄生曲霉探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 Aspergillus parasiticus
曲霉屬通用探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 Aspergillus spp.
奧葉茲基氏病病毒探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 Aujeszky's Disease Virus(ADV)
禽腺病毒探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 Avian Adenovirus
1(RT-1、RT-1)禽皰疹病毒1型探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 Avian Herpesvirus 1(Gallid Herpesvirus-1、GaHV-1)1
2(RT-2、RT-2)禽皰疹病毒2型探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 Avian Herpesvirus 2(Gallid Herpesvirus-2、GaHV-2)2
禽類支原體通用探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 Avian Mycoplasma spp.
禽致病性大腸桿菌1血清型探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 Avian Pathogenicity Escherichia coli(APEC) O1
鳥類多瘤病毒探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 Avian Polyomavirus(APV)
副雞禽桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 Avibacterium paragallinarum
皰疹病毒探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 B Virus(BV)B
雙芽巴貝斯蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 Babesia bigemina
牛巴貝斯蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 Babesia bovis
駑巴貝斯蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 Babesia caballi
犬巴貝斯蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 Babesia canis
分歧巴貝斯蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 Babesia divergens
馬巴貝斯蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 Babesia equi
吉氏巴貝斯蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 Babesia gibsoni
大巴貝蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 Babesia major
莫氏巴貝斯蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 Babesia motasi
羊巴貝斯蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 Babesia ovis
柏氏巴貝斯蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 Babesia perroncitoi
巴貝斯屬蟲通用探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 Babesia spp.
炭疽芽孢桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 Bacillus anthracis
33蠟狀芽孢桿菌33探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 Bacillus cereus E33 E33
蠟樣芽胞桿菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 Bacillus cereus
幼蟲芽胞桿菌(美洲蜂幼蟲腐臭病)探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 Bacillus larvae
SURE 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10 克隆感受態(tài)細(xì)胞
SURE 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50 克隆感受態(tài)細(xì)胞
SURE 電擊感受態(tài)細(xì)胞 50ul*5 克隆感受態(tài)細(xì)胞
SURE 電擊感受態(tài)細(xì)胞 50ul*20 克隆感受態(tài)細(xì)胞
DH10B 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10 克隆感受態(tài)細(xì)胞
DH10B 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50 克隆感受態(tài)細(xì)胞
DH10B 電擊感受態(tài)細(xì)胞 50ul*5 克隆感受態(tài)細(xì)胞
DH10B 電擊感受態(tài)細(xì)胞 50ul*20 克隆感受態(tài)細(xì)胞
DH10B-Plus 電擊感受態(tài)細(xì)胞 50ul*5 克隆感受態(tài)細(xì)胞
DH10B-Plus 電擊感受態(tài)細(xì)胞 50ul*20 克隆感受態(tài)細(xì)胞
DH10Bac 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10 克隆感受態(tài)細(xì)胞
DH10Bac 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50 克隆感受態(tài)細(xì)胞
BJ5183 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10 克隆感受態(tài)細(xì)胞
BJ5183 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50 克隆感受態(tài)細(xì)胞
BJ5183 電擊感受態(tài)細(xì)胞 50ul*5 克隆感受態(tài)細(xì)胞
BJ5183 電擊感受態(tài)細(xì)胞 50ul*20 克隆感受態(tài)細(xì)胞
BJ5183-AD-1 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10 克隆感受態(tài)細(xì)胞
BJ5183-AD-1 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50 克隆感受態(tài)細(xì)胞
BJ5183-AD-1 電擊感受態(tài)細(xì)胞 50ul*5 克隆感受態(tài)細(xì)胞
鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量PCR檢測試劑盒BJ5183-AD-1 電擊感受態(tài)細(xì)胞 50ul*50 克隆感受態(tài)細(xì)胞
Stable 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10 克隆感受態(tài)細(xì)胞
Stable 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50 克隆感受態(tài)細(xì)胞
stable 電擊感受態(tài)細(xì)胞 50ul*5 克隆感受態(tài)細(xì)胞