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          上海莼試生物技術有限公司>>PCR試劑盒>>熒光定量PCR檢測試劑盒>>50T克氏食道線蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒

          克氏食道線蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒

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          • 克氏食道線蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒

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          具體成交價以合同協(xié)議為準
          • 型號 50T
          • 品牌 其他品牌
          • 廠商性質 經(jīng)銷商
          • 所在地 上海市

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          更新時間:2020-06-01 10:46:56瀏覽次數(shù):457

          聯(lián)系我們時請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,謝謝!

          產品簡介

          CAS 詳見說明書 純度 詳見說明書
          分子量 詳見說明書 分子式 詳見說明書
          供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T
          貨號 CP934542 應用領域 化工
          主要用途 公司產品僅用于科研    
          克氏食道線蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒所謂實時熒光定量PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。

          詳細介紹

          注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。

          產品名稱

          克氏食道線蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒

          英文名稱

          Oesophagostomum clumbianum

          貨號

          CP934542

          儲存條件:

          14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
          1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
          2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
          3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
          4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
          5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

          探針法:

          克氏食道線蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒aqMan 探針是一種寡核苷酸探針,它的熒光與目的序列的擴增相關。它與目標序列上游引物和下游引物之間的序列配對。熒光基團連接在探針的5’ 末端,而淬滅劑則在3’ 末端。當完整的探針與目標序列配對時,熒光基團發(fā)射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進行延伸反應時,聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進行酶切,使得熒光基團與淬滅劑分離。隨著擴增循環(huán)數(shù)的增加,釋放出來的熒光基團不斷積累。因此熒光強度與擴增產物的數(shù)量呈正比關系。相對于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準確性。
          使用方法:
          一、樣品DNA的制備
          用自選方法提取細菌樣品DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
          二、制備O157:H7標準曲線(以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽性對照。
          1. 標記6個離心管,分別為6,5,4,3,2和1號。
          2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水(用帶芯槍頭,下同)。
          3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
          4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽性對照。
          5. 換槍頭,從6號管中取5 μL溶液到5號管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的陽性對照。
          6. 換槍頭,從5號管中取5 μL溶液到4號管中,重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
          7. NC管中不加任何陽性對照。
          8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進行定量PCR(見下步),每個樣品做3次重復。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標準曲線。
          探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖:

          應用案例:
          樣品 DNA 的制備
          1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
          稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DN段作為陽性對照。
          2.標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
          3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
          4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
          6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
          7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
          8.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。設置 qPCR 反應(20  μL 體系,在樣品制備室進行)
          9.在 PCR 管中加入下列成分。
          以下是公司正在銷售的產品:

          對茴香酰酸二酯酶2(Phosphodiesterase 2)

          對基芐酸二酯酶3A(Phosphodiesterase 3A)

          對酞酰酸二酯酶4A(Phosphodiesterase 4A)

          對硝基芐基酸二酯酶4B(Phosphodiesterase 4B)

          二基氨基酰酸二酯酶5A(Phosphodiesterase 5A)

          二氧基酸二酯酶7B(Phosphodiesterase 7B)

          癸基酸二酯酶8A(Phosphodiesterase 8A)

          克氏食道線蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒環(huán)己基酸二酯酶9A(Phosphodiesterase 9A)

          己二酰酸二酯酶10A(Phosphodiesterase 10A)

          苯-4-磺酰酸二酯酶11A(Phosphodiesterase 11A)

          磺酰谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase)

          間硝基苯磺酰5% ferric ammonium sulfate溶液      

          焦酰picric acid-orange G solution   溶液

          聯(lián)苯基-4-羰基1% phosphotungstic acid      溶液

          鄰苯磺酰酮戊二酸脫酶(αketoglutarate dehydrogenase)二氨基前他達拉非 Diethylaminopretadalafil1588526-67-330mg/支,供HPLC法檢查用

          二硝托胺純度標準物質Purity of dinitolmide100mg/瓶

          二縮三二醇(三甘醇) Triethylene glycol112-27-61ml/瓶,供有關物質檢查用

          二縮三二醇(三甘醇) Triethylene glycol112-27-61ml/瓶,供有關物質檢查用

          二縮三二醇 Tripropylene Glycol24800-44-01ml,供有關物質檢查用

          二縮三二醇 Tripropylene Glycol24800-44-01ml,供有關物質檢查用

          二十一酰(C21:0)二十一酰(C21:0),標準品,有證書 ,100mg/500mg/1gm

          二十一酸酯(C21:0)28898-67-1二十一酸酯(C21:0),標準品,有證書 ,100mg/500mg/1gm/5gm/10gm

          二十一酸鈉(C21:0)二十一酸鈉(C21:0),標準品,有證書 ,100mg

          二十一酸酯(C21:0)6064-90-0二十一酸酯(C21:0),標準品,有證書 ,100mg/500mg/1gm/5gm/10gm

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