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          上海莼試生物技術(shù)有限公司>>PCR試劑盒>>熒光定量PCR檢測試劑盒>>50T絲狀支原體簇探針法熒光定量PCR檢測試劑盒

          絲狀支原體簇探針法熒光定量PCR檢測試劑盒

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          • 型號 50T
          • 品牌 其他品牌
          • 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
          • 所在地 上海市

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          更新時(shí)間:2020-06-01 09:33:48瀏覽次數(shù):489

          聯(lián)系我們時(shí)請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,謝謝!

          產(chǎn)品簡介

          CAS 詳見說明書 純度 詳見說明書
          分子量 詳見說明書 分子式 詳見說明書
          供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T
          貨號 CP934504 應(yīng)用領(lǐng)域 化工
          主要用途 公司產(chǎn)品僅用于科研    
          絲狀支原體簇探針法熒光定量PCR檢測試劑盒所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。

          詳細(xì)介紹

          產(chǎn)品名稱

          絲狀支原體簇探針法熒光定量PCR檢測試劑盒

          英文名稱

          Mycoplasma mycoides cluster

          貨號

          CP934504

          儲存條件:

          14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
          1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
          2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
          3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
          4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
          5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

          探針法:

          絲狀支原體簇探針法熒光定量PCR檢測試劑盒aqMan 探針是一種寡核苷酸探針,它的熒光與目的序列的擴(kuò)增相關(guān)。它與目標(biāo)序列上游引物和下游引物之間的序列配對。熒光基團(tuán)連接在探針的5’ 末端,而淬滅劑則在3’ 末端。當(dāng)完整的探針與目標(biāo)序列配對時(shí),熒光基團(tuán)發(fā)射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進(jìn)行延伸反應(yīng)時(shí),聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進(jìn)行酶切,使得熒光基團(tuán)與淬滅劑分離。隨著擴(kuò)增循環(huán)數(shù)的增加,釋放出來的熒光基團(tuán)不斷積累。因此熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系。相對于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準(zhǔn)確性。
          使用方法:
          一、樣品DNA的制備
          用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
          二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線(以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽性對照。
          1. 標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為6,5,4,3,2和1號。
          2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水(用帶芯槍頭,下同)。
          3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
          4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽性對照。
          5. 換槍頭,從6號管中取5 μL溶液到5號管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的陽性對照。
          6. 換槍頭,從5號管中取5 μL溶液到4號管中,重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對照。
          7. NC管中不加任何陽性對照。
          8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR(見下步),每個(gè)樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個(gè)陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
          探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖:

          應(yīng)用案例:
          樣品 DNA 的制備
          1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費(fèi)贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
          稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DN段作為陽性對照。
          2.標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
          3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
          4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
          6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
          7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
          8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對照。放冰上待用。設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20  μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)
          9.在 PCR 管中加入下列成分。
          以下是公司正在銷售的產(chǎn)品:

          疊氮鈉化妝品糖精(saccharin)含量比色法定量檢測試盒

          酸鈉咖糖精(saccharin)含量比色法定量檢測試盒

          動物糖酸鈉飲料糖精(saccharin)含量紫外光譜法定量檢測試盒

          對氨基柳酸鈉糖果糖精(saccharin)含量紫外光譜法定量檢測試盒

          對二氨基偶氮苯鄰羧酸鈉食物糖精(saccharin)含量紫外光譜法定量檢測試盒

          對羥基苯酸鈉藥品糖精(saccharin)含量紫外光譜法定量檢測試盒

          絲狀支原體簇探針法熒光定量PCR檢測試劑盒多聚偏酸鈉化妝品糖精(saccharin)含量紫外光譜法定量檢測試盒

          二次胂酸鈉咖糖精(saccharin)含量紫外光譜法定量檢測試盒

          二硫八氧酸鈉飲料糖精(saccharin)含量紅外光譜法定量檢測試盒

          二煙酰胺腺嘌呤二核苷酸鈉糖果糖精(saccharin)含量紅外光譜法定量檢測試盒

          二辛基磺化二酸鈉食物糖精(saccharin)含量紅外光譜法定量檢測試盒

          二鹽基酸鈉藥品糖精(saccharin)含量紅外光譜法定量檢測試盒

          釩酸鈉化妝品糖精(saccharin)含量紅外光譜法定量檢測試盒

          泛影鈉咖糖精(saccharin)含量紅外光譜法定量檢測試盒

          麩氨酸鈉飲料糖精(saccharin)含量薄層色譜法定性檢測試盒環(huán)沙星溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),有證書85721-33-1環(huán)沙星溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),有證書 100ug/ml,1.2ml

          環(huán)沙星,純品型,標(biāo)準(zhǔn)品,有證書85721-33-1環(huán)沙星,純品型,標(biāo)準(zhǔn)品,有證書 ,0.1g

          環(huán)沙星 Ciprofloxacin86483-48-9100mg,供HPLC含量測定用

          環(huán)苯達(dá)唑Ciclobendazole(Cyclobendazole)50mg

          環(huán)孢素系統(tǒng)適用性對照品Ciclosporin for system suitability50mg

          環(huán)孢素 Ciclosporin59865-13-3100mg,供HPLC含量測定用

          環(huán)-(甘氨酰-谷氨酰胺) Cyclo(-Gln-Gly)52662-00-710mg/支,供有關(guān)物質(zhì)檢查用

          環(huán)-(甘氨酰-谷氨酰胺) Cyclo(-Gln-Gly)52662-00-710mg/支,供有關(guān)物質(zhì)檢查用

          環(huán)-(L-氨酰-L-谷氨酰胺)Cyclo(-Ala-Gln)10mg/支

          環(huán)-(L-氨酰-L-谷氨酰胺)Cyclo(-Ala-Gln)10mg/支

          注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

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