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美國(guó)奧豪斯離心機(jī)怎么樣,介紹如下:
1. 取含有噬菌粒的TG1菌種1ml (菌數(shù)目為1E10)加入含有100ml 2xYT-GA培養(yǎng)基250ml搖瓶中,使用奧豪斯搖床37度220rpm搖菌搖床至OD600為約0.5。
2. 取OD600為約0.5的菌液20ml (菌數(shù)目為1E10),按照MOI為20:1加入pfu為2E11的輔助噬菌體M13 K07,37度220rpm振蕩半小時(shí)進(jìn)行感染。
3. 取感染后菌液到50ml離心管使用奧豪斯離心機(jī)5816R 3200g離心10分鐘,去除培養(yǎng)基,以除去培養(yǎng)基中的葡萄糖對(duì)噬菌粒中p3蛋白融合了抗體片段蛋白表達(dá)的抑制。
4. 用2xYT-AK培養(yǎng)基重懸菌團(tuán),將培養(yǎng)基加至400ml,用1L搖瓶在30度220rpm過(guò)夜搖菌。
5. 將400ml菌液均分至大的離心瓶中,使用奧豪斯離心機(jī)5816R 10000g離心10分鐘,取上清,10000g再次離心10分鐘,去除殘留的菌體碎片。
6. 取90ml PEG溶液加入400ml上清液中,在4℃孵育1小時(shí)并伴隨著柔和的振蕩,然后使用帶低溫控制功能的奧豪斯離心機(jī)5816R 4℃10000g離心1小時(shí)。
7. 去上清,用10mlPBS重懸噬菌體后,加入2.5ml PEG溶液再次沉淀.
8. 冰上孵育20分鐘,然后使用帶低溫控制功能的奧豪斯離心機(jī)5816R 4℃ 10000g離心半小時(shí)。
9. 去上清液,用吸水紙吸干殘留的PEG溶液,加入1-2ml的PBS重懸噬菌體,進(jìn)行滴度測(cè)定。
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