技術(shù)文章
細(xì)胞侵襲科研實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)介紹
閱讀:38 發(fā)布時(shí)間:2024-9-19應(yīng)用簡(jiǎn)介
腫瘤細(xì)胞通過膜表面特定受體與基質(zhì)或基底膜的層粘連蛋白、纖維連接蛋白和IV型膠原等相粘連,然后腫瘤細(xì)胞可釋放蛋白水解酶或激活基質(zhì)中已存在的酶原,使基質(zhì)成分降解,最后腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)而充填到被水解了的基質(zhì)的空隙處,如此三個(gè)過程不斷重復(fù)腫瘤細(xì)胞不斷向深層侵襲。
技術(shù)原理
本實(shí)驗(yàn)采用的Matrigel是從小鼠EHS肉瘤中提取的基質(zhì)成分,含有LN、IV型膠原等。將Matrigel鋪在Transwell侵襲小室的多孔濾膜上,能形成與天然基底膜極為相似的基底膜結(jié)構(gòu)。具有侵襲能力的細(xì)胞在趨化劑誘導(dǎo)下可穿過多孔濾膜,侵襲細(xì)胞經(jīng)染色后,在顯微鏡下觀察和計(jì)數(shù)。
實(shí)驗(yàn)方法
1、照相前一定要晾干,照相時(shí)將小室正置于載玻片上,在倒置顯微鏡下觀察、照相。
2、使用Matrivgel前應(yīng)從-20℃轉(zhuǎn)移至4℃待其自然溶化(如過夜放置),避免反復(fù)凍融。
3、使用時(shí)需接觸Matrivgel的試管、移液吸頭等均應(yīng)預(yù)冷于4℃。
4、使用Matrivgel時(shí)注意無菌操作。