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體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)常見(jiàn)問(wèn)題與解答
—熱點(diǎn)問(wèn)題—
第一題 一張玻片可觀察到200個(gè)中期分裂相嗎?如果不夠,該如何處理?
大多數(shù)情況下,一張玻片很難找到200個(gè)可用于分析的中期分裂相,建議同一個(gè)劑量組多制作一些玻片,本公司一個(gè)劑量組通常會(huì)制作至少4張玻片,以保證足夠中期分裂相細(xì)胞可供分析。
第二題 如何辨別細(xì)胞是否處于中期分裂相?
中期分裂相細(xì)胞染色體數(shù)目、形態(tài)比較固定,染色體包含兩條染色單體,具體見(jiàn)下圖:
第三題 有絲分裂指數(shù)測(cè)定的意義是什么?
中期分裂相指數(shù)是指所觀察的細(xì)胞中中期分裂相細(xì)胞的占比,是一項(xiàng)反映細(xì)胞增殖程度的指標(biāo)。
第四題 油鏡如何使用?是否要將油鏡鏡頭整個(gè)浸入油中?
油鏡的使用需要搭配香柏油,香柏油與玻璃的折光率相近,光線穿過(guò)載玻片進(jìn)入香柏油發(fā)生折射較少,而進(jìn)入油鏡的光較多,視野較為明亮。油鏡使用時(shí),需要將油鏡鏡頭浸入香柏油中,并與玻片接觸,使用結(jié)束后使用少量二甲苯擦拭干凈鏡頭。
第五題 中期分裂相細(xì)胞少是什么原因?qū)е拢咳绾蝺?yōu)化?
中期分裂相細(xì)胞少的原因如下:
(1)秋水仙素的劑量過(guò)小,作用時(shí)間過(guò)短;
(2)重懸時(shí)固定液量過(guò)大,細(xì)胞密度過(guò)低。
優(yōu)化策略:
(1)秋水仙素劑量大,則作用時(shí)間短;
(2)秋水仙素劑量小,則適當(dāng)延長(zhǎng)作用時(shí)間,請(qǐng)選擇適宜的劑量和時(shí)間;
(3)根據(jù)細(xì)胞的收集量確定重懸體積;
(4)適當(dāng)增加滴片的數(shù)量。
第六題 染色體聚集可能是由哪些原因?qū)е拢?/span>
染色體聚集的可能原因如下:
(1)秋水仙素用量過(guò)多,導(dǎo)致染色體的過(guò)度濃縮;
(2)低滲時(shí)間不足,導(dǎo)致染色體聚集在一起分散不開(kāi);
(3)細(xì)胞懸液未充分吹打均勻;
(4)載玻片未進(jìn)行預(yù)冷,玻片表面張力不夠;
(5)滴片高度不夠。
第七題 染色體分散過(guò)度可能是由哪些原因?qū)е拢?/span>
染色體分散過(guò)度的根本原因就是細(xì)胞膜破裂。主要由以下可能:
(1)低滲時(shí)間過(guò)長(zhǎng);
(2)離心速度過(guò)高;
(3)細(xì)胞操作過(guò)程不注意,操作過(guò)度;
(4)滴片距離過(guò)高。
第八題 染色體畸變?cè)囼?yàn)閱片需要配套什么樣的顯微鏡?如何操作?
染色體畸變?cè)囼?yàn)使用中期分裂相阻斷劑(如秋水仙素或秋水仙胺)處理細(xì)胞,使細(xì)胞停止在中期分裂相,此時(shí)染色體形態(tài)、數(shù)目都比較固定,使用普通生物顯微鏡即可進(jìn)行染色體結(jié)構(gòu)畸變觀察。先于低倍鏡下尋找背景清晰、分散良好、染色體收縮適中的中期分裂相細(xì)胞,再于油鏡下進(jìn)行染色體畸變觀察并記錄。
第九題 玻片想要長(zhǎng)期保存,需要如何處理?
如果玻片要長(zhǎng)期保存,必須要做好封片(可使用中性樹(shù)脂膠并加蓋玻片),并置于陰涼干燥處保存。
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