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甘油醛-3-磷酸脫氫酶的介紹
閱讀:774 發(fā)布時(shí)間:2022-12-13該酶是糖酵解反應(yīng)中的一個(gè)酶,由4個(gè)30-40kDa的亞基組成,分子量146kDa。該酶基因?yàn)楣芗遥╤ouse keeping)基因,幾乎在所有組織中都高水平表達(dá),在同種細(xì)胞或者組織中的蛋白質(zhì)表達(dá)量一般是恒定的,且不受含有的部分識(shí)別位點(diǎn)、佛波脂等的誘導(dǎo)物質(zhì)的影響而保持恒定,故被廣泛用作抽提total RNA,poly(A)+ RNA,Western blot等實(shí)驗(yàn)操作的標(biāo)準(zhǔn)化的內(nèi)參。常用的內(nèi)參有,ACTB(β-actin、β-肌動(dòng)蛋白)、GAPDH或18S等。目的是在于避免RNA定量誤差、加樣誤差以及各PCR反應(yīng)體系中擴(kuò)增效率不均一、各孔間的溫差等所造成的誤差、這些都是管家基因,在各個(gè)組織中的表達(dá)量相對(duì)穩(wěn)定,其中18S同整個(gè)基因譜有關(guān)(負(fù)責(zé)裝配),它在總RNA中占的比例最高。
轉(zhuǎn)染了GAPDH相關(guān)siRNA的HeLa細(xì)胞在轉(zhuǎn)染后48小時(shí)后不斷增殖。 紅:被標(biāo)記的siRNA;藍(lán):被染色的細(xì)胞核;綠色:GAPDH蛋白。
陰性對(duì)照(scrambled siRNA)的導(dǎo)入(左)對(duì)GAPDH蛋白的表達(dá)沒(méi)有影響,不過(guò)若轉(zhuǎn)入一個(gè)以GAPDH(右)為靶標(biāo)的siRNA,則會(huì)導(dǎo)致GAPDH蛋白表達(dá)水平的急劇下降。