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流式細胞DNA分析臨床意義
閱讀：773 發(fā)布時間：2022-11-23流式細胞儀的臨床應(yīng)用:
1. 流式細胞術(shù)在腫瘤學(xué)中的應(yīng)用：流式細胞術(shù)可以檢測腫瘤細胞增殖周期、檢測腫瘤細胞表面標(biāo)記、癌基因表達產(chǎn)物、進行多藥耐藥性分析、檢測凋亡;
2. 流式細胞術(shù)在血液學(xué)中的應(yīng)用：檢測白血病和淋巴瘤細胞、活化血小板、造血干細胞(CD34+)計數(shù)、白血病與淋巴瘤的免疫分型、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)、細胞移植的交叉配型和免疫狀態(tài)監(jiān)測;
3. 流式細胞術(shù)在免疫學(xué)中的應(yīng)用：可以進行淋巴細胞及其亞群分析、淋巴細胞免疫分型、檢測細胞因子。異常結(jié)果：有資料表示對71例胸腔積液做流式細胞DNA分析，結(jié)果顯示，對惡性胸腔積液診斷的敏感性為52%，特異性達100%。若與常規(guī)檢查聯(lián)合應(yīng)用，則可使診斷的敏感性達到94%。癌性胸水細胞的DNA分析可見異倍體和S期、G2/M期細胞比例增高。
流式細胞DNA分析檢查過程：
流式細胞儀并非是自動化的儀器，準(zhǔn)確的實驗結(jié)果還需要準(zhǔn)確的人工技術(shù)配合，所以標(biāo)本制備需要規(guī)范，儀器本身亦需要質(zhì)量控制。
(一)流式細胞術(shù)免疫學(xué)檢測的影響因素和質(zhì)量控制
流式細胞術(shù)在免疫學(xué)中有著廣泛的應(yīng)用，其免疫熒光染色的標(biāo)本制備非常重要，常常由于標(biāo)本制備過程中出現(xiàn)人為非特異性熒光干擾(尤其在間接免疫熒光染色中)或細胞濃度低等影響檢測結(jié)果。解決這些影響因素的方法如下：
(1)確保標(biāo)本上機檢測前的濃度為1X106細胞/ml，細胞濃度過低直接影響檢測結(jié)果。
(2)使用蛋白封閉劑，封閉非特異結(jié)合位點，尤其在間接免疫熒光標(biāo)記時需要。常用的蛋白封閉劑為0.5%牛血清白蛋白和1%胎牛血清。
(3)熒光抗體染色后充分洗滌，注意混勻和離心速度，減少重疊細胞和細胞碎片。
(4)設(shè)置對照樣品，采用與抗體來源同型匹配的無關(guān)對照和熒光抗體的本底對照。
(5)判定結(jié)果時，應(yīng)注意減去本底熒光，為使免疫熒光的定量分析更精確，應(yīng)用計算機程序軟件，用擬合曲線方法從實驗組的曲線峰值中減去對照組的曲線峰值，可以得到更準(zhǔn)確的免疫熒光定量結(jié)果。
(6)注意染色后避光，保證細胞免疫熒光的穩(wěn)定。
(二)DNA倍體分析的質(zhì)量控制仍沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，各文獻報道的實驗結(jié)果差異較大，1993年10月美國癌癥研究組織制定了FCMDNA測定的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，我們根據(jù)這些標(biāo)準(zhǔn)并結(jié)合國內(nèi)有經(jīng)驗的專家多年的實踐，對FCM的DNA分析技術(shù)的質(zhì)控和注意事項進行說明。
(1)手術(shù)切除的新鮮標(biāo)本或活檢針吸標(biāo)本取材時，要避免出血壞死組織。
(2)標(biāo)本采集后要及時固定或深低溫保存，以免組織發(fā)生自溶，DNA降解，而造成測試結(jié)果的誤差。
(3)固定劑要采用對組織細胞穿透性強的濃度，70%的乙醇固定效果較好。
(4)單細胞懸液制備過程中，注意將待測細胞成分分離出來，減少其他成分的干擾，并注意不要損傷該群細胞。
(5)細胞樣品的采集要保證足夠的細胞濃度，即1X106細胞/ml，雜質(zhì)、碎片、團塊和重疊細胞應(yīng)8%，與腫瘤細胞的異質(zhì)性有關(guān)。另外，DNA倍體分析時，同源組織的不同個體會出現(xiàn)10%的漂移。
(6)DNA倍體標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)量控制，采用相同個體同源正常組織、同樣固定方法、相同的樣品處理方法、相同的染色方法、同步染色、同樣的儀器檢測條件、正常的二倍體組織作為內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)。