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脂質(zhì)體細(xì)胞轉(zhuǎn)染的方法
閱讀：954 發(fā)布時(shí)間：2022-11-17幾種常見的轉(zhuǎn)染方法：
1、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法
陽(yáng)離子脂質(zhì)體表面帶正電荷，能與核酸的磷酸根通過(guò)靜電作用，將DNA分子包裹入內(nèi)，形成DNA脂復(fù)合物，也能被表面帶負(fù)電的細(xì)胞膜吸附，再通過(guò)融合或細(xì)胞內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細(xì)胞中，是目前實(shí)驗(yàn)室常用的轉(zhuǎn)染方法之一，其轉(zhuǎn)染率較高，優(yōu)于磷酸鈣法。
2、磷酸鈣共沉淀法
該方法可重復(fù)性差，而且磷酸鈣溶液對(duì)溫度、pH和緩沖鹽濃度的變化十分敏感，對(duì)細(xì)胞尤其是原代細(xì)胞毒性較大，也不能采用RPMI培養(yǎng)基，因?yàn)槠浜懈邼舛鹊牧姿猁}。
3、電穿孔轉(zhuǎn)染法
電流能夠可逆地?fù)舸┘?xì)胞膜形成瞬時(shí)的小孔促使DNA分子進(jìn)入胞內(nèi)，這種方法就是電穿孔。
當(dāng)遇到某些脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率很低或幾乎無(wú)法轉(zhuǎn)入時(shí)可以用電穿孔法轉(zhuǎn)染。
一般情況下，高電場(chǎng)強(qiáng)度會(huì)殺死50%-70% 的細(xì)胞?，F(xiàn)在針對(duì)細(xì)胞死亡開發(fā)出了一種電轉(zhuǎn)保護(hù)劑，可以大大的降低細(xì)胞的死亡率，同時(shí)提高電穿孔轉(zhuǎn)染效率。
4、病毒感染
對(duì)于脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染與電穿孔轉(zhuǎn)染都無(wú)法成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系可以采用病毒感染，腺病毒，腺相關(guān)病毒，逆轉(zhuǎn)錄病毒和慢病毒載體已廣泛用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞體內(nèi)外的基因轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染效率比較高，適用于較難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。
但是插入的片段長(zhǎng)度有一定限制，最重要的是技術(shù)難度比較高，在一般實(shí)驗(yàn)室中很難普及，而且某些病毒起效時(shí)間比較慢，跟不上細(xì)胞這種快速繁殖的速度，如果只是做簡(jiǎn)單細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染性價(jià)比不高。
沒有一種方法適用于所有的細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)，理想的方法應(yīng)根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行選擇，如果只是在細(xì)胞水平做，而且用的是簡(jiǎn)單細(xì)胞系，那么脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染是綜合比較起來(lái)不錯(cuò)的一個(gè)方法。