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用溴甲酚紫法測定白蛋白含量的流程
閱讀：1203 發(fā)布時間：2021-12-21實驗原理
溴甲酚紫法（BCP法）是一種測定白蛋白含量的方法。實驗原理為在pH5.2的緩沖液中，有Brij-35存在時，溴甲酚紫(bromocresol puple，BCP)可與白蛋白結合形成綠色復合物，在波長603nm處的吸光度與白蛋白濃度成正比例，與同樣處理的白蛋白標準比較，可求得血清中白蛋白含量。
實驗原理
在pH5.2的緩沖液中，有Brij-35存在時，溴甲酚紫(bromocresol puple，BCP)可與白蛋白結合形成綠色復合物，在波長603nm處的吸光度與白蛋白濃度成正比例，與同樣處理的白蛋白標準比較，可求得血清中白蛋白含量。
試劑與器材
1．250g/LBrij-35溶液見BCG法
2．50mmol/L BCP貯存液稱取BCP 675mg溶于無水乙醇15ml中，當溶液變?yōu)槌壬该鲿r，用無水乙醇稀釋至25ml。置4C冰箱保存至少可穩(wěn)定3個月。
3．2.5mol/L醋酸溶液量取冰醋酸150ml用蒸餾水稀釋至1L。
4．BCP試劑稱取無水醋酸鈉6.03g（或三結晶水的醋酸鈉10g）溶于蒸餾水950ml中，加Brij-35液1ml，BCP貯存液1ml，用2.5mol/L醋酸溶液調pH至5.20+0.03（約需10ml），加蒸餾水至1L（BCP貯存液也可在調好pH后再加）。在室溫可穩(wěn)定一周。
5．0.154mol/L NaCl溶液稱取NaCl9g用蒸餾水溶解至1L。
6．白蛋白標準液采用人白蛋白或定值，切不可用動物血清蛋白。
操作步驟
1．生化自動分析儀分析法參數見有關儀器操作說明書。
2．手工操作法。
混勻，1min后在波長603nm處比色，用空白管調零，讀取測定管和標準管吸光度。
評價
本法反應最適pH為5.20，接近α-和β-球蛋白的等電點，抑制了這兩種球蛋白與BCP的非特異性反應，故對測定白蛋白具有高特異性。此外，BCP與白蛋白的反應為即時*反應，不受時間和溫度變化的影響，呈色后穩(wěn)定1h以上。本法線性范圍5-50g/L,在10-40g呈線性良好,50g/l時稍偏低；CV為0.45%;回收率99.3%~102%,平均回收率100.5%.本法兼有BCG法的主要優(yōu)點，克服了BCG法的多數缺點，與火箭電泳法結果相一致，成為測定血清白蛋白燃料結合法中較好的一個方法。BCP與牛，豬（新鮮或凍干）血清反應性僅為BCG反應的1/3，不適用于動物血清白蛋白作質量控制，機制尚待闡明。