化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
葡聚糖凝膠的性質(zhì)和作用
閱讀：1077 發(fā)布時(shí)間：2021-11-18葡聚糖凝膠指的是由一定平均相對(duì)分子質(zhì)量的葡聚糖(dextran) 和甘油基以醚橋形式相互交聯(lián)而成，具有立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，應(yīng)用面廣的一類凝膠，國(guó)外商品名為Sephadex。交聯(lián)度的大小，可通過控制交聯(lián)劑(一般為環(huán)氧氯b烷) 和葡聚糖的配比以及反應(yīng)條件來控制。
性質(zhì)：
1、化學(xué)穩(wěn)定性
葡聚糖凝膠不溶于一切溶劑（除非它被化學(xué)降解）。它在水、鹽溶液、有機(jī)溶劑、堿和弱酸性溶液中都是穩(wěn)定的，在強(qiáng)酸中凝膠骨架的糖苷鍵被水解。長(zhǎng)期接觸氧化劑將破壞凝膠，因而應(yīng)避免使用。
2、物理穩(wěn)定性
葡聚糖凝膠并不熔融，可以在濕態(tài)、中性PH進(jìn)行滅菌或在高壓滅菌器120℃、30分鐘而不影響它的色譜性質(zhì)。干態(tài)的凝膠加熱至120℃以上將開始焦糖化。葡聚糖凝膠的機(jī)械強(qiáng)度取決于交聯(lián)度。
產(chǎn)品用途
利用分子篩作用，進(jìn)行多肽分離、脫鹽、清洗生物提取液、分子量測(cè)定。
交聯(lián)葡聚糖的商品名為Sephndex，不同規(guī)格型號(hào)的葡聚糖用英文字母G表示，G后面的阿拉伯?dāng)?shù)為凝膠得水值的10倍。
方法分類
1.乙醇浸泡：在室溫下，將干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時(shí)，并不斷攪拌以保證凝膠溶脹，用無鹽水洗去殘存的乙醇濾干;
2.無鹽水浸泡：室溫下，在無鹽水中充分溶脹24小時(shí)，間隙攪拌，以保證凝膠的*溶脹，然后；
3.鹽酸浸泡：在常溫下再用0.2NHCl浸泡12小時(shí)，間隙攪拌，濾干，水洗至中性；
4.將溶脹好的凝膠脫氣后（真空抽濾或超聲波）根據(jù)裝柱要求一次性置入柱內(nèi)，注意保持濕態(tài)裝柱，并避免柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡或斷層；
5.上樣前平衡層析柱至少3-5個(gè)柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止（流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值）；
6.凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積，我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積，視分離情況可以調(diào)整；脫鹽時(shí)上樣量可以達(dá)到20%的柱床體積，柱高的選擇也與分離要求相關(guān)，柱高控制在40-50cm以下，過高的凝膠層會(huì)引起較大的反壓，應(yīng)當(dāng)盡可能避免。難分離物質(zhì)要有一定柱高和流速控制，脫鹽時(shí)高徑比為5：1即可；
7.洗脫方法：可以用無鹽水，也可以采用上柱時(shí)的緩沖液洗脫；在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化；
8.在位清洗（CIP）凝膠使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以
40cm/h用1M氫氧化na反向洗四個(gè)柱體積，再以至少三個(gè)柱體積平衡緩沖液再生。
儲(chǔ)運(yùn)特性
1、未使用，室溫保存即可。
2、使用后保存方法如下：凝膠層析的載體不會(huì)與被分離的物質(zhì)發(fā)生任何作用，因此凝膠柱在層析分離后稍加平衡即可進(jìn)行下一次的分離操作。但使用多次后，由于床體積變小，流動(dòng)速率降低或雜質(zhì)污染等原因，使分離效果受到影響。此時(shí)對(duì)凝膠柱需進(jìn)行再生處理，其方法是:先用水反復(fù)進(jìn)行逆向沖洗，再用緩沖溶液平衡，即可進(jìn)行下一次分離。對(duì)使用過的凝膠，若短時(shí)間保存，只要反復(fù)洗滌除去蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，加入適量防腐劑即可；
3、若長(zhǎng)期保存，則需將凝膠從柱中取出，進(jìn)行洗滌、脫水和干燥等處理后，裝瓶保存。