效率與合規(guī)之間的平衡——在生物制藥生產(chǎn)中，DNA 去除的巧妙解決方案

　　默克限制性內(nèi)切酶典型應(yīng)用：

　　• 為達(dá)到藥品監(jiān)管當(dāng)局對(duì)生物制品不斷提高的核酸殘量限制而提供的解決方案

　　• 大大降低核酸物質(zhì)對(duì)目標(biāo)分離物純化及生物活性的干擾，終有效提高生化藥物在純化工藝過程中的產(chǎn)品收率

　　1.產(chǎn)品簡介：

　　是用于生化藥物生產(chǎn)的外源性核酸酶。其分子量為 30 KD，等電點(diǎn)為 pH 6.85。

　　Benzonase® 在 pH 6—10, 0—42℃條件下能有效工作。使用時(shí)必須有 Mg²+(1-2mM)存在，以作為激活劑(詳細(xì) 操作條件參后)。此產(chǎn)品供應(yīng)時(shí)以 20mM Tris-HCI(pH 8.0)，2mM MgCI2，20mM NaCI 作為緩沖液，50%(v/v) 甘油作為穩(wěn)定劑，分成 10 萬，50 萬酶活性包裝單位。

　　同時(shí)每批的一級(jí)純 Benzonase®(Purity I，99%)核酸內(nèi)切酶的內(nèi)毒素含量都進(jìn)行獨(dú)立嚴(yán)格測(cè)定，以滿足生化制藥的生產(chǎn)需要。其整體內(nèi)毒素含量都小于 0.25 EU per 1.000 units(LAL test)。

　　2. 監(jiān)管信息：

　　美國食品藥物管理局(FDA)規(guī)章條例被視為生物制藥領(lǐng)域嚴(yán)格的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。但由于過程分離原料直接應(yīng)用于有效成分的純化，而不會(huì)殘留在終的產(chǎn)品中，因此 FDA 沒有明確的規(guī)章來監(jiān)控諸如Benzonase® 核酸內(nèi)切酶這樣的應(yīng)用于純化領(lǐng)域的原料。但是默克對(duì)產(chǎn)品的安全性重視。在cGMP 條件下生產(chǎn)，而且在 FDA 擁有 DMF 文件(II 類，注冊(cè)號(hào) BBMF5403)。另外，默克通過 DIN ISO9001 和 14001 質(zhì)量管理體系認(rèn)證。

　　• 可降解各種形態(tài)的 DNA 和 RNA(包括：單鏈，雙鏈，環(huán)狀以及環(huán)狀超螺旋型)

　　• 廣泛的可操作條件(可在通常純化工藝條件下配合使用)

　　• 高效的核酸酶活性，活性高達(dá)(>1.0 x 106 Units/mgprotein*)

　　• 被廣泛應(yīng)用于生物制藥行業(yè)的各領(lǐng)域(疫苗類制品，基因治療法中病毒載體的生產(chǎn)，治療性蛋白(如：包涵體的處理)，真核生物系統(tǒng)表達(dá)的單克隆抗體)

　　• 無蛋白酶活性(基于現(xiàn)有的蛋白酶測(cè)定方法) • Under standard conditions 1ng (ca. 1U) of Benzonase® cleaves Ca. 1.5μg of native DNA per minute resulting in acid soluble fragments

　　• 為確保 FDA 對(duì)生物重組類產(chǎn)品中核酸殘留量的嚴(yán)格 限制(核酸含量 <100pg per dose)，利用Benzonase® 核酸內(nèi)切酶來去除產(chǎn)品中的核酸物質(zhì)。

　　• 降低細(xì)胞破碎時(shí)被處理樣品的粘度，以提高后續(xù)純化過程的效率和終產(chǎn)品收率。

　　• 用于包涵體的處理，以提高復(fù)性后可溶性包涵體的收率。

　　• 利用 Benzonase® 核酸酶對(duì) 2D—凝膠電泳的樣品進(jìn)行上樣前處理，消除樣品中核酸物質(zhì)對(duì)蛋白的影響，終明顯提高 2D 電泳的分辨率。

　　默克限制性內(nèi)切酶包裝單位 訂貨號(hào)

　　Benzonase® 非限制性核酸內(nèi)切酶一級(jí)純(purity grade Ⅰ 99%)250 U/ul， for Biotechnology

　　100, 000 U/vial 1.01695.0001

　　500, 000 U/vial 1.01697.0001

　　5, 000, 000 U/vial 1.01697.0010

　　Benzonase® 非限制性核酸內(nèi)切酶二級(jí)純(purity grade Ⅱ 90%)250 U/ul， for Biotechnology

　　100, 000 U/vial 1.01654.0001

　　500, 000 U/vial 1.01656.0001

　　Benzonase® 非限制性核酸內(nèi)切酶 ELISA kit II 檢測(cè)試劑盒for the immunological detection of Benzonase® endonuclease

　　5 plates(8x12)plus reagents 1.01681.0001