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薄層層析硅膠板使用說(shuō)明
樂(lè)研化學(xué)薄層層析硅膠板涂層的主要成分為SiO2.nH2O，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，除強(qiáng)堿外，不與其他酸堿反應(yīng)。具有分離效果好，塔板數(shù)高，點(diǎn)樣斑點(diǎn)小，分離時(shí)間短，靈敏度高，斑點(diǎn)清晰，不擴(kuò)散等特點(diǎn)；適用于醫(yī)藥，化工，生化，環(huán)保等系統(tǒng)的科研和檢測(cè)；對(duì)于某些微量以及成分復(fù)雜的化合物有很好的分離效果，適用于定性和半定量分析。
經(jīng)典操作和注意事項(xiàng)：
1、點(diǎn)樣
分析板：
點(diǎn)樣一般為圓點(diǎn)（不能太大），點(diǎn)樣基線距底邊0.5~1.0 cm，點(diǎn)樣直徑為1~2 mm，點(diǎn)間距離約為0.5~1.0 cm，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不影響檢出為宜；
注意事項(xiàng)：
（1）配制樣品溶液時(shí)應(yīng)選用對(duì)組分溶解度較好的溶劑；溶劑的粘度不宜過(guò)高，以便于點(diǎn)樣；溶劑的沸點(diǎn)要適中，沸點(diǎn)過(guò)低，樣品溶液中溶劑易揮發(fā)，會(huì)改變?nèi)芤簼舛葘?dǎo)致較大誤差。沸點(diǎn)過(guò)高，會(huì)使樣品溶液的溶劑殘留于原點(diǎn)，導(dǎo)致展開(kāi)劑極性異常變化，常用的溶劑為甲醇；
（2）點(diǎn)樣時(shí)要控制力度，避免損傷涂層表面；
（3）點(diǎn)樣后必須待溶劑揮發(fā)*后，再進(jìn)行展開(kāi)，但要避免長(zhǎng)時(shí)間高溫加熱，以免改變待測(cè)組分的性質(zhì)。
制備板：
取一塊制備板，在距離底部2~3?cm處用鉛筆畫(huà)一條直線；取一次性滴管，在吸管口處嵌入適量脫脂棉后吸入待分離樣品溶液，沿著制備板上的基線均勻移動(dòng)，然后用吹風(fēng)機(jī)吹干，反復(fù)操作，直至上樣完成；將制備板置于展開(kāi)缸中，硅膠面背對(duì)展缸玻璃面；展開(kāi)結(jié)束后，取出、晾干，在紫外燈下面用鉛筆標(biāo)出所需的色帶，用刮刀刮下，選擇大極性溶劑，浸泡攪拌1~2小時(shí)，過(guò)濾、洗滌、旋干即可。
注意事項(xiàng)：
（1）待分離的樣品必須在硅膠中穩(wěn)定；且難溶性樣品不適合此方法；
（2）上樣量的計(jì)算方法：1 mm厚的硅膠板的負(fù)載量不要超過(guò)5 mg/cm3。以20*20?cm，厚度為1 mm厚硅膠板為例：若上樣帶寬是0.5?cm，板子兩邊空出0.5?cm邊際，上樣量約為0.5*19*5=47.5 mg，以此類推；
（3）基線必須保持在展開(kāi)劑的液面以上，防止待分離樣品溶于展開(kāi)劑；
（4）為保證溶出效率，需將刮下的硅膠碾碎。安全起見(jiàn)，操作者應(yīng)帶口罩，在風(fēng)速小的環(huán)境下進(jìn)行；
（5）浸泡硅膠常用的溶劑是二氯甲烷/甲醇：20/1~10/1，注意不能超過(guò)這個(gè)比例，否則硅膠中的部分物質(zhì)會(huì)被溶解；
（6）制備板展開(kāi)前后，所有使用的容器都要確保干凈，盡量避免使用真空油脂；
2、展開(kāi)劑
（1）化合物分離效率大小用Rf（化合物距離基線的距離除以溶劑的前沿距基線的距離）值表達(dá)，Rf值在0.15~0.85之間，盡量控制主要物質(zhì)Rf值在0.3~0.7之間，Rf值與展開(kāi)劑的相對(duì)極性有密切關(guān)系。其中常用溶劑的極性順序如下：水（大）>甲酰胺>乙腈>甲醇>乙醇>丙醇>丙酮>二氧六環(huán)>甲乙酮>正丁醇>乙酸乙酯>異丙醚>二氯甲烷>三氯甲烷>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳>環(huán)己烷>己烷>煤油（小）；
（2）展開(kāi)劑的選擇：?jiǎn)我坏娜軇┩荒苓_(dá)到很好的分離效果，正常使用混合溶劑即高極性與低極性組成的混合體系（不限于2種，有可能是3種以上，根據(jù)底物的性質(zhì)決定），常用的溶劑組合有：石油醚/乙酸乙酯、二氯甲烷/甲醇、石油醚/丙酮、石油醚/二氯甲烷、乙酸乙酯/甲醇、乙酸乙酯、乙酸乙酯、乙腈/水等，具體比例要結(jié)合實(shí)際情況，或參考文獻(xiàn)中報(bào)道的展開(kāi)劑配比；
（3） 薄層層析硅膠板展開(kāi)過(guò)程中部分樣品會(huì)有拖尾現(xiàn)象，主要是因?yàn)闃悠肪哂兴峄驂A的化學(xué)成分，且部分在溶液中電離，展開(kāi)時(shí)存在分子，離子兩種狀態(tài)，主要解決方法是：若樣品酸性比較大，一般在展開(kāi)劑中加酸（0.1%~0.5%甲酸，乙酸）；若樣品堿性比較大，一般在展開(kāi)劑中加堿（0.1%~0.5%氨水，三乙胺）。
3、展開(kāi)室
薄層展開(kāi)室需預(yù)先用展開(kāi)劑飽和，可在室中加入足夠量的展開(kāi)劑，并在壁上貼二條與室一樣高、寬的濾紙條，一端浸入展開(kāi)劑中，密封室頂?shù)纳w，使系統(tǒng)平衡。將點(diǎn)好樣品的薄層層析硅膠板放入展開(kāi)室的展開(kāi)劑中，浸入展開(kāi)劑的深度為距薄層板底邊0.5~1.0cm(切勿將樣點(diǎn)浸入展開(kāi)劑中)，密封室蓋，待展開(kāi)至規(guī)定距離，取出薄層板，晾干，并進(jìn)行后續(xù)的檢驗(yàn)。
4、常用顯色劑及其配制方法
5、儲(chǔ)存與活化
薄層層析硅膠板具有很強(qiáng)的吸濕性，應(yīng)存放于密封干燥處，請(qǐng)勿與易揮發(fā)性物質(zhì)一起存放。拆封后未用完的硅膠板應(yīng)立刻密封，以免吸潮或吸附其他化學(xué)物質(zhì)而影響分離性能；若硅膠板吸潮，可活化后再使用（放置于110oC的烘箱中，烘30分鐘）
6、安全防護(hù)措施
薄層層析硅膠板的使用中需要全程帶手套，若不小心被玻璃板劃傷，可參考如下方式做緊急處理：
（1）若傷口不大不深，出血不多，傷口干凈，可用酒精消毒傷口周圍，不要將消毒液弄進(jìn)傷口內(nèi)，待干后用消毒紗布覆蓋包扎，或用創(chuàng)可貼粘貼；
（2）若傷口不干凈，要先用碘酒沿周圍皮膚消毒一次，再用酒精消毒兩次，然后用少量生理鹽水沖洗傷口，沖洗時(shí)用藥棉輕輕擦拭傷口，去除異物，后再對(duì)傷口周圍的皮膚進(jìn)行再一次消毒，并用紗布覆蓋包扎；
（3）若傷口較深，接觸到化合物，還須速去醫(yī)院，進(jìn)行專業(yè)的醫(yī)護(hù)處理，必要時(shí)注射破傷風(fēng)育苗。