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熒光顯微鏡激發(fā)熒光的方式有哪些
熒光顯微鏡是醫(yī)院科研、病理、檢驗等部門常用的醫(yī)用光學儀器之一。因為普通的顯微鏡是在明亮的背景上觀察暗物，而熒光顯微鏡是在暗背景下觀察彩色的圖像，因此它比普通的顯微鏡分辨力提高100倍，可以觀察到普通顯微鏡看不到的細節(jié)。但是它的調(diào)整，校正難度較高，只要解決了熒光顯微鏡的問題，其它顯微鏡問題就迎刃而解。
光源是熒光顯微鏡主要組成部分，熒光顯微鏡都采用200W的超高壓汞燈作光源。它是由石英玻璃制作，中間呈球形，內(nèi)充有一定量的汞，工作時在兩極間放電，引起水銀蒸發(fā)，球內(nèi)氣壓迅速升高，當水銀*蒸發(fā)時，可達50～70個標準大氣壓力，這一過程一般約5～15min。超高壓汞燈的發(fā)光是電極間放電使水銀分子在不斷解離和還原過程中發(fā)射光量子的結(jié)果。它發(fā)射很強的紫光，足以激發(fā)各類熒光物質(zhì)，因此被熒光顯微鏡普遍采用。
熒光顯微鏡是免疫熒光組織化學的基本工具。它是由超高壓光源、濾片系統(tǒng)(包括激發(fā)和壓制濾板)、光學系統(tǒng)和攝影系統(tǒng)等主要部件組成，是利用一定波長的光激發(fā)標本發(fā)射熒光。
熒光顯微鏡激發(fā)熒光的方式：按光的波長范圍分為UV激發(fā)法(使用紫外線照明法)和BV激發(fā)法(使用藍紫光)兩種。
UV激發(fā)法是用短于400nm外光進行激發(fā)。該法不存在可見的激發(fā)光，所以被觀察的熒光呈現(xiàn)該染料固有的熒光，容易判別標本上的特異熒光和背景組織的自身熒光。
BV激發(fā)法是以404nm、434nm為中心的由紫外至藍光進行激發(fā)。該方法使用藍光照射標本，所以熒光顯微鏡的截止濾光片必須使用可*阻斷藍光并可充分通過所需綠、黃熒光的濾光片。用于熒光抗體法的熒光色素。對于激發(fā)光的極大吸收波長和熒光的極大發(fā)光波長比較接近，所以BV激發(fā)法使用的濾光片必須使用銳截止式濾光片。該法可用藍光作為激發(fā)光，所以熒光色素的吸收效率較高，可得到較明亮的圖像。其缺點是500nm以下的熒光無法看到，而500nm以上的使整個圖像顯黃色。在熒光抗體法中，大多以熒光色素*的顏色來判斷其特異性，所以在討論微妙的特異性時，上述BV激發(fā)法的缺點往往影響極大。