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曠場實驗測試方法、指標(biāo)評價及注意事項
閱讀：2483 發(fā)布時間：2022-9-7曠場實驗是經(jīng)典的情緒相關(guān)行為學(xué)檢測實驗, 最早由 Hall 設(shè)計。是用于檢測動物在陌生環(huán)境中的行為表現(xiàn),包括自發(fā)活動行為和探索行為,是評價動物在新異環(huán)境中自主行為、探究行為與緊張度的一種方法。檢測指標(biāo)為動物第一次進(jìn)入中央?yún)^(qū)的潛伏期、中央?yún)^(qū)停留時間和穿行次數(shù);結(jié)合抑郁模型可檢測動物的“抑郁樣"行為和藥物的抗抑郁作用,檢測指標(biāo)為動物的開場活動性,可人工計數(shù)動物的水平爬格次數(shù)和垂直站立次數(shù)作為行為指標(biāo),也可采用自動攝像記錄動物運(yùn)動軌跡,并采用行為學(xué)分析軟件進(jìn)行分析運(yùn)動距離、運(yùn)動速度、休息時間等行為指標(biāo)。該實驗亦可用于評價抗抑郁藥物的起效速率。
實驗材料
曠場實驗箱通常分為大鼠和小鼠兩種規(guī)格，其中大鼠曠場實驗箱建議尺寸為100cm*100cm*40cm，小鼠曠場實驗箱尺寸建議為50cm*50cm*40cm。實驗箱材質(zhì)采用黑色或者白色單面磨砂亞克力為宜，也可以使用中性顏色（如藍(lán)色）的醫(yī)用ABS工程塑料，內(nèi)壁不可反光。
曠場實驗的分析軟件可使用VisuTrack動物行為分析軟件（上海欣軟），自動跟蹤目標(biāo)老鼠的運(yùn)動軌跡，識別動物的頭部、重心及尾巴，直接生成活動軌跡圖、區(qū)域偏好指數(shù)圖和活動量熱圖等。
Tip：很多老師也可以自制這樣的儀器，很簡單，但需要注意實驗箱體高度不能太高，容易造成角落光線不均勻。另外，實驗箱底部的顏色盡量保持與實驗動物的差異性，方便軟件更好的識別動物。如果實驗室購買了VisuTrack動物動物行為分析軟件，不需要在實驗箱底部劃分小方格了，VisuTrack軟件里可以自動劃分。
實驗方法
曠場實驗操作簡單,在用于抑郁行為學(xué)評價中,無適期階段,操作步驟如下 :
(1) 實驗前,動物應(yīng)適應(yīng)檢測環(huán)境 30 ~ 60 min；
(2)實驗人員在VisuTrack軟件中預(yù)先設(shè)置好相應(yīng)的參數(shù)，記錄好動物的編號、日期、狀態(tài)信息；
(3) 動物放入測試箱后,即開始檢測,檢測時間宜為5~10 min;
(4) 每次實驗時應(yīng)從同一位置同一方向?qū)游锓湃霚y試箱中央。
評價指標(biāo)
(1) 總路程(total distance)：動物在實驗記錄時間內(nèi)產(chǎn)生的物理位移累積；
(2) 速度(speed)：動物在單位時間產(chǎn)生的物理位移。5min內(nèi)正常動物總路程多為1000~2500cm,速度為3~8cm/ s。動物出現(xiàn)抑郁行為時,速度減少；
(3) 運(yùn)動總時間(total move time)：動物在實驗記錄時間內(nèi)的產(chǎn)生物理位 移時所需的時間累積。正常動物運(yùn)動時間多大于檢測時間的30%;抑郁行為判斷標(biāo)準(zhǔn):與對照組相比有顯著性減低(P<0. 05)；
(4) 站立次數(shù)(number of standing)：動物在實驗記錄時間內(nèi)的站立總次數(shù)。10min檢測時間,正常大鼠站立次數(shù) 20 ~ 50 次。10min檢測時間,空白對照組小鼠站立次數(shù) 60~130次；抑郁行為判斷標(biāo)準(zhǔn):與對照組相比顯著減低 (P < 0. 05)。
（5）糞便數(shù)量反應(yīng)大鼠的焦慮情況。
注意事項
1、實驗前需要對實驗動物每天撫摸1-2min以減少非特異性應(yīng)激刺激對實驗動物檢測中的影響。
2、實驗過程中需要弱光照明，觀察者盡量與測試動物分隔。
3、實驗過程中需要環(huán)境安靜。
4、進(jìn)行曠場檢測時，需要對實驗動物進(jìn)行篩選，有些實驗動物在正常情況下水平方向或垂直方向的活動情況顯著低于同批動物平均水平，則需要將這些動物預(yù)先剔除。
5、實驗前需要提前至少3小時將動物帶入實驗室，降低動物對新環(huán)境的不安情緒。
6、實驗動物的性別、周齡盡量保持一致，因為激素水平可能會影響動物行為。
7、注意實驗動物的晝夜節(jié)律，在24h內(nèi)有其活動周期，盡量選擇同一時間段開展實驗。
8、OFT實驗對動物各方面影響較小，而其他行為學(xué)實驗（如強(qiáng)迫游泳、水迷宮、懸尾實驗）影響較大，因此同一批動物進(jìn)行不同行為學(xué)測試時，應(yīng)先進(jìn)行OFT實驗。
9、實驗應(yīng)在隔音，光強(qiáng)度和溫、濕度適宜且保持一致的行為實驗室內(nèi)進(jìn)行。
10、兩次實驗之間清洗實驗設(shè)備，以免上次動物余留信息影響下次實驗結(jié)果。