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賽爾瑞成（北京）生命科學(xué)技術(shù)有限公司
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CRD0無血清無DMSO細(xì)胞凍存液新品上市啦！
細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中細(xì)胞進(jìn)行保種并長(zhǎng)期保存的常用方法，其中細(xì)胞凍存液，作為細(xì)胞凍存時(shí)必須使用的一種溶液，不僅僅是說只是用來進(jìn)行細(xì)胞的保存，在細(xì)胞的購(gòu)買、寄贈(zèng)、交換和運(yùn)送過程中也起著關(guān)鍵作用，因此選擇一款好的細(xì)胞凍存液就尤為重要。
細(xì)胞凍存要取得好的效果，多采用血清、甘油或二甲基亞砜(DMSO)等作為保護(hù)劑，最大限度的保存細(xì)胞活力。這些物質(zhì)有些能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性，在緩慢冷凍過程中可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。同時(shí)，有些保護(hù)劑在細(xì)胞外也能減輕溶液中高濃度溶質(zhì)對(duì)細(xì)胞的損傷，進(jìn)一步避免細(xì)胞在冷凍和復(fù)蘇過程中受到損傷。滲透性保護(hù)劑DMSO和非滲透性保護(hù)劑血清（主要含白蛋白）是使用最為廣泛，效果最為穩(wěn)定可靠的。
此外，采用“慢凍快融”的方法能較好地保證細(xì)胞存活。標(biāo)準(zhǔn)冷凍速度開始為-1到-2℃/分鐘，當(dāng)溫度低于-25℃時(shí)可加速，到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃)。復(fù)蘇細(xì)胞采用快速融化的方法，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷。
現(xiàn)有凍存方法存在的問題：
1、DMSO對(duì)細(xì)胞存在一定的毒性，用量受到限制，降低或者不使用DMSO，尋找其它替代物是比較好選擇。
2、血清，即使是純化得到的白蛋白，由于其動(dòng)物來源的特性，會(huì)極大增加帶來病毒等感染物質(zhì)的可能。而且，血清來源受限，價(jià)格昂貴，所以其使用也必然會(huì)受到越來越多的限制。因此，尋找替代血清的非滲透性保護(hù)劑也顯得尤為必要。
3、目前，成熟和穩(wěn)定的凍存細(xì)胞技術(shù)是將加有保護(hù)劑的細(xì)胞懸液置于-196℃液氮中，這樣可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而保持細(xì)胞的特性，在需要的時(shí)候經(jīng)過復(fù)蘇程序，使得細(xì)胞重新生長(zhǎng)增殖以用于實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞儲(chǔ)存在-196℃液氮中，理論上儲(chǔ)存時(shí)間是無限的，但是液氮凍存步驟繁瑣，需要經(jīng)過程序降溫，如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘，然后移至-20℃冰箱30分鐘，再移至-80℃冰箱保存16-18個(gè)小時(shí)(或隔夜)，最后才移至液氮罐中進(jìn)行長(zhǎng)期的儲(chǔ)存。(其中需要注意的是-20℃條件下不可超過1個(gè)小時(shí)，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量的死亡。)
賽爾瑞成科學(xué)家團(tuán)隊(duì)在細(xì)胞凍存領(lǐng)域進(jìn)行了大量研究工作，分別于2015年研發(fā)了 “Cellregen無血清細(xì)胞凍存液”（貨號(hào)：CF0101） 和2020年研發(fā)了 “無血清低DMSO細(xì)胞凍存液”（貨號(hào)：CF0201；申請(qǐng)?zhí)枺?02010307890.6）。這兩款凍存液均是不含血清，含DMSO，非程序降溫、可-80℃長(zhǎng)期冷凍保存的通用型細(xì)胞凍存液 ，區(qū)別在于“Cellregen無血清細(xì)胞凍存液”(貨號(hào)：CF0101)的DMSO含量為10%， “無血清低DMSO細(xì)胞凍存液”(貨號(hào)：CF0201)DMSO的含量為5%(與傳統(tǒng)細(xì)胞凍存液的對(duì)比可參考附表) ，產(chǎn)品均獲得了廣大科研工作者的喜愛。
“Cellregen無血清細(xì)胞凍存液”（貨號(hào)：CF0101）鏈接
“無血清低DMSO細(xì)胞凍存液”（貨號(hào)：CF0201）鏈接
鑒于某些類型的細(xì)胞對(duì)DMSO敏感，使用含DMSO的細(xì)胞凍存液可能會(huì)影響細(xì)胞的功能，賽爾瑞成繼續(xù)研究工作，開發(fā)出一款無血清、無DMSO、無毒性、非程序降溫、-80℃可長(zhǎng)期冷凍保存的凍存液體系：CRD0無血清無DMSO細(xì)胞凍存液（貨號(hào)：CF0301）。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
☆ 高安全性，不含血清及動(dòng)物源成分，病毒、霉菌和支原體等污染可能性低，各批產(chǎn)品之間有更高的產(chǎn)品質(zhì)量一致性。
☆ 無DMSO，對(duì)細(xì)胞無潛在的毒性作用。
☆ 細(xì)胞存活率高，無批次差異。
☆ *凍存液配方，可直接使用，方便簡(jiǎn)捷。
☆ 可直接存放于-80℃冰箱凍存，無需經(jīng)過費(fèi)時(shí)的程序降溫過程(省時(shí)、省力、省錢)，不需要采用程序降溫儀，更不需要放置在-196℃液氮。
☆ 可原位凍存，比如雜交瘤細(xì)胞的亞克隆，可以大規(guī)模減少工作量，避免污染。
CRD0無血清無DMSO細(xì)胞凍存液凍存效果：
圖1. 3T3細(xì)胞復(fù)蘇后細(xì)胞狀態(tài)圖
3T3細(xì)胞存活率>90%
圖2. ATDC5細(xì)胞復(fù)蘇后細(xì)胞狀態(tài)圖
ATDC5存活率>90%
圖3 小鼠脾臟T細(xì)胞復(fù)蘇后細(xì)胞凋亡圖
三個(gè)批次復(fù)蘇率均>95%，且批次間凍存效果無明顯差異
附表：通用細(xì)胞凍存液，CRD10無血清細(xì)胞凍存液、CRD5無血清低DMSO細(xì)胞凍存液，CRD0無血清無DMSO細(xì)胞凍存液的比較
| 通用細(xì)胞凍存液 | CRD10無血清 細(xì)胞凍存液 | CRD5無血清低DMSO 細(xì)胞凍存液 | CRD0無血清無DMSO 細(xì)胞凍存液 | |
| 主要成份 | 含血清， 含DMSO | 不含血清， 含 DMSO 10% | 不含血清， 低DMSO 5% | 不含血清， 不含DMSO |
| 細(xì)胞毒性 | 高 | 高 | 低 | 無 |
| 安全性 | 低 動(dòng)物來源病毒、霉菌和支原體等污染的風(fēng)險(xiǎn)偏高 | 高 無動(dòng)物來源病毒、霉菌和支原體等污染的風(fēng)險(xiǎn) | 高 無動(dòng)物來源病毒、霉菌和支原體等污染的風(fēng)險(xiǎn) | 高 無動(dòng)物來源病毒、霉菌和支原體等污染的風(fēng)險(xiǎn) |
| 凍存細(xì)胞種類 | 適合含血清細(xì)胞凍存 | 通用型 適合各類細(xì)胞凍存 | 通用型 適合各類細(xì)胞凍存 | 通用型 適合各類細(xì)胞凍存 |
| 無血清培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài) | 易改變易由懸浮狀態(tài)回復(fù)貼壁狀態(tài) | 保持懸浮培養(yǎng)狀態(tài) | 保持懸浮培養(yǎng)狀態(tài) | 保持懸浮培養(yǎng)狀態(tài) |
| 批次差異 | 批次差異大 | 無批次差異 | 無批次差異 | 無批次差異 |
| 操作方法 | 步驟繁瑣 需程序降溫凍存 | 簡(jiǎn)單快捷 一步凍存-80℃冰箱 | 簡(jiǎn)單快捷 一步凍存-80℃冰箱 | 簡(jiǎn)單快捷 一步凍存-80℃冰箱 |
| 保存設(shè)備 | 要求高（液氮） | 要求低（-80℃冰箱） | 要求低（-80℃冰箱） | 要求低（-80℃冰箱） |
| 微量?jī)龃?/strong> | 細(xì)胞易死亡，存活率偏低 | 細(xì)胞存活率高 | 細(xì)胞存活率高 | 細(xì)胞存活率高 |
| 原位凍存 | 不可行 | 可行，且方便快捷 如: 雜交瘤細(xì)胞孔板凍存 | 可行，且方便快捷 如: 雜交瘤細(xì)胞孔板凍存 | 可行，且方便快捷 如: 雜交瘤細(xì)胞孔板凍存 |
