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供貨周期 | 現貨 | 貨號 | 61GSTTLB |
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該試劑可用于生化和細胞兩種形式,以研究各種相互作用:蛋白質 / 蛋白質、蛋白質 / 肽、蛋白質 / DNA、蛋白質 / RNA、蛋白質 / 碳水化合物、蛋白質 / 小分子、受體 / 配體。
產品貨號 | 產品名稱 | 規(guī)格 |
61GSTTLB | HTRF MAB ANTI GST-TB | 20K PTS |
單克隆抗體 Anti GST-Tb 穴狀化合物是一種針對用鋱(Tb)標記 S - 轉移酶產生的 IgG2a 抗體。已證明它可與來自大量表達載體的 GST 標簽融合蛋白發(fā)生反應。
該試劑可用于生化和細胞兩種形式,以研究各種相互作用:蛋白質 / 蛋白質、蛋白質 / 肽、蛋白質 / DNA、蛋白質 / RNA、蛋白質 / 碳水化合物、蛋白質 / 小分子、受體 / 配體。
HTRF 可以檢測從皮摩爾到低毫摩爾的廣泛親和力常數范圍。
產品特點
檢測原理:
在 HTRF 相互作用檢測中,一部分(直接或間接)用供體標記,另一部分用受體標記(同樣直接或間接)。信號強度與兩部分的結合成正比。在此處所示的例子中:單克隆抗體 Anti GST-Tb 穴狀化合物與帶 GST 標簽的 A部分結合,而B 部分* 與用 HTRF 受體標記的特異性抗體結合。* B部分也可以是化的、帶標簽的、Fc 融合的。在這些情況下,使用相應的用受體標記的 HTRF 試劑(抗標簽、抗物種、蛋白 A、鏈霉親和素)進行檢測。
檢測方案:
右側的例子描述了使用 20 µL 最終檢測體積來檢測帶 GST 標簽的A部分和未帶標簽的B部分 * 之間相互作用的方案。分配兩個部分(10 µL),孵育,加入單克隆抗體 Anti GST-Tb 穴狀化合物(5 µL)和用受體標記的抗B部分(5 µL),孵育并讀取。* B部分也可以是化的、帶標簽的、Fc 融合的或直接標記的。在這些情況下,使用相應的用受體標記的 HTRF 試劑(抗標簽、抗物種、蛋白 A、鏈霉親和素)進行檢測。
檢測細節(jié):
測試次數與活性部分如何相關?
每孔的平均結合物數量反映了總體生物材料含量。通常優(yōu)選使用活性部分的量而不是總結合物的量。對于穴狀化合物和 d2 結合物,總結合物的量等于活性部分的量,因為標記的分子量可以忽略不計。對于用 XL665 標記的實體則不是這樣,總結合物的量將根據 XL665 結合物的最終摩爾比而變化,然而,Revvity 提供的活性部分的量是恒定的,并且基于訂購的測試次數。
推薦的穴狀化合物和 XL665 結合物的量:
穴狀化合物結合物不能過量,以防止讀數器飽和和不可接受的背景水平。在大多數情況下,1 到 5nM 的穴狀化合物濃度是合適的,并且根據所使用的與 HTRF 兼容的讀數器,在 620nm 處將產生 20,000 到 80,000 cps。XL665 結合物必須盡可能與其檢測對應物匹配,以便最大數量的生物分子被 XL665 受體標記。因此,要檢測濃度為 20nM 的帶標簽分子,抗標簽 - XL665 的濃度應是等摩爾或更高。