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-20℃ 避光

1.避免反復(fù)凍融。
2.可以根據(jù)需要分裝后凍存。
3.探針為DMSO溶液，在2-8℃時是固體狀態(tài)，冬季氣溫較低時為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

6個月

熒光分光光度計或熒光酶標(biāo)儀

血清

1.使用方便：可用熒光分光光度計、熒光酶標(biāo)儀檢測； 2.背景低，靈敏度高； 3.線性范圍寬，使用方便。

1.熒光分光光度計或熒光酶標(biāo)儀，
2.離心機(jī)
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒

PBS緩沖液或者HBSS

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
4.熒光檢測專用黑色96孔板

1.螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體灑落。? 2.熒光探針標(biāo)記后，一定要洗凈殘余的未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的探針，否則會導(dǎo)致背景較高。
3.探針標(biāo)記完畢并洗凈殘余探針后，可以進(jìn)行激發(fā)波長的掃描和發(fā)射波長的掃描，以確認(rèn)探針的標(biāo)記情況是否正常。
4.盡量縮短探針標(biāo)記后到測定所用的時間，以減少各種可能的誤差。
5.原位檢測必須使用熒光檢測專用的黑色透明底96孔細(xì)胞培養(yǎng)板。
6.以下操作步驟僅供參考，請根據(jù)實際樣本情況調(diào)整或參考文獻(xiàn)。

試劑準(zhǔn)備： 根據(jù)樣本數(shù)量，用純水將O72探針10倍稀釋。充分混勻，配制成探針工作液，備用。 【注】： ?不可以一次性將探針全部稀釋。 ?現(xiàn)配現(xiàn)用。 ?也可以不稀釋探針，直接在待檢測血清樣品中加入1-2 μl探針，但是需要用好的移液器和吸頭，注意操作過程，保證探針有效的加入了樣品中，并充分混勻。 樣本檢測： 1.在96孔板中加入100微升新鮮血清樣本、10-20微升O72探針工作液，用移液器吹打，使之充分混勻。 【注】： ?注意選擇合適的96孔板，熒光檢測需要使用黑色板。 ?不同樣本的活性氧差異較大，需要根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果調(diào)整探針用量。一般加入2-10 μl探針，染色終濃度按試劑盒中探針母液的200-1000倍稀釋，200倍稀釋適合大多數(shù)樣本。 ?如果熒光強(qiáng)度太強(qiáng)，超過了檢測儀器的量程，可以減少探針用量。保證所有樣本探針用量一致即可。 ?以酶標(biāo)儀檢測為例。也可以用熒光分光光度計檢測，根據(jù)所使用儀器決定液體體積和染色容器。 2.在37℃避光孵育15-30分鐘。 3.置于熒光光度計或酶標(biāo)儀中，后于激發(fā)波長為516 nm、發(fā)射波長606 nm檢測熒光強(qiáng)度。 【注】： ?必須使用熒光檢測專用的黑色96孔板。 ?如果熒光強(qiáng)度太強(qiáng)，超過了儀器的檢測范圍，可以將孵育后的勻漿上清液稀釋后再檢測。一般稀釋5-50倍。 ?熒光強(qiáng)度強(qiáng)則過氧亞硝基陰離子（ONOO–）含量高。 ?可以用實驗中對照血清的熒光強(qiáng)度值為基準(zhǔn)，待測組血清的熒光強(qiáng)度值占對照血清的百分比來比較過氧亞硝基陰離子（ONOO–）程度差異。

?Xiqing Cheng et al. Biomimetic Metal–Organic Framework Composite-Mediated Cascade Catalysis for Synergistic Bacteria Killing ACS Applied Materials & Interfaces 2020 （IF=8.758）