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          目錄:上海貝博生物科技有限公司>>蛋白質(zhì)生物學(xué)>>蛋白提取和裂解>> 血小板膜蛋白提取試劑盒
          
		
          
	
          
    	
          
		
          
			
          血小板膜蛋白提取試劑盒
          
		
          
		
          
			
		
          
	
          
	
          
		
          
			
          
           				    
            
			        
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			                血小板膜蛋白提取試劑盒
			            
            
			        
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          具體成交價以合同協(xié)議為準
          
					
          
                    					
          
						
          
							
                                                         
          
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          更新時間：2024-11-24 17:18:51瀏覽次數(shù)：80評價
          
						
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                      產(chǎn)品概述                                 product description                                                                                                                              貝博® BBproExtra® 血小板膜蛋白提取試劑盒適用于從各種動物血小板中提取膜蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內(nèi)完成。   本試劑盒含有的配方能夠有效溶解膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。   本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。   本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。   本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。
					
          
					
					
                               
                                   
                                       保存溫度                         
                                   
                                       2-8℃                         
                               
                           
                                                                           
                               
                                   
                                       注意事項                         
                                   
                                       1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
          2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
          3.試劑拆封后請盡快使用完！
                                   
                               
                           
                                                                           
                               
                                   
                                       有效期                         
                                   
                                       一年                         
                               
                           
                                                                           
                               
                                   
                                       檢測方法                         
                                   
                                       WB,IP等                           
                               
                           
                                                                           
                               
                                   
                                       適用樣本                         
                                   
                                       動物血小板                         
                               
                           
                                                                           
                               
                                   
                                       產(chǎn)品特點                         
                                   
                                       1.使用方便，將蛋白提取的時間縮短至30分鐘。
          2.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
          3.紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

                                   
                               
                           
                                                                           
                               
                                   
                                       產(chǎn)品應(yīng)用                         
                                   
                                       WB,IP等                           
                               
                           
                                                                           
                               
                                   
                                       儀器準備                         
                                   
                                       1.離心機
          2.振蕩器
          3.渦旋混勻器
          4.移液器
          5.冰箱
          6.冰盒                          
                               
                           
                                                                           
                               
                                   
                                       試劑準備                         
                                   
                                       1.PBS緩沖液 
          2.蛋白定量試劑盒                         
                               
                           
                                                                           
                               
                                   
                                       耗材準備                         
                                   
                                       1.離心管
          2.吸頭
          3.一次性手套                         
                               
                           
                                                                           
                               
                                   
                                       使用注意事項                         
                                   
                                        使用注意事項：
          ? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
          ? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
          ? 實驗過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
          ? 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
          ? 如果試劑盒不能短時間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
          ? 可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
          ? 下游實驗如果是進行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時間。
                                   
                               
                           
                                                                           
                               
                                   
                                       使用方法                         
                                   
                                       1． 提取液準備：
          每500ul冷的蛋白提取液A中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
          每500ul蛋白溶解液C中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
          2． 取1-5ml ACD抗凝血，室溫200g離心10分鐘。
          3． 收集上層血漿，棄下層血液細胞沉淀。
          4． 上層血漿室溫3000g離心10分鐘，棄上清，收集沉淀。
          5． 沉淀中加入500ul 提取液B洗滌一次，3000g離心10分鐘，棄上清，收集沉淀。
          6． 沉淀中加入300-500ul冷的蛋白提取液A，充分混勻后，在4℃條件下振蕩20-30分鐘。
          7． 在4℃，12000g條件下離心10分鐘，取上清。
          8． 在37℃水浴10分鐘。
          9． 在37℃， 1000g離心3分鐘。
          10． 此時液體分為2層，小心移除上層溶液，留管底部的下層，大約30-50ul液體。
          11． 用1-2倍體積的膜蛋白溶解液C溶解該液體，即得血小板膜蛋白樣品。
          12． 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?br>                         
                               
                           
                                                                           
                               
                                   
                                       常見問題分析                         
                                   
                                       1.蛋白濃度低？
          血小板膜蛋白豐度較低，在條件允許的情況下，需要盡可能加大血小板的上樣量。
          處理部分組織樣本時可能沒有裂解，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長試劑的處理時間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

          2.用什么方法定量蛋白？
          建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準。如果已經(jīng)進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

          3.提取的蛋白具有活性嗎？
          本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒有對蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。

          4.膜蛋白電泳沒有條帶？
          膜蛋白樣品通常濃度較低，電泳前一定要進行蛋白定量，以保證電泳是蛋白上樣量足夠。
          膜蛋白提取好后，用溶解液充分溶解后，可以超聲處理一下，再進行蛋白定量。
          蛋白加Loading buffer后可以不用煮沸，采用50℃保溫30分鐘。
          蛋白Loading buffer中SDS終濃度含量可以提高至3%-10%。
          有些樣品的膜蛋白含量太低，可以使用丙酮沉淀膜蛋白，再使膜蛋白溶解于上樣緩沖液中，一般可以跑出清晰的蛋白條帶。
          電泳時最后采用低電壓低電流電泳。
                                   
                               
                           
                                                                                       
          

                                                                                    				
          

			
          
		
          
	
          
	
          
	
	
	 		 
	
          
		
          
			
          
				
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