RIPA裂解液是一種常用的細(xì)胞裂解緩沖液，用于從培養(yǎng)的細(xì)胞或組織樣本中提取蛋白質(zhì)。這種緩沖液能夠有效破裂細(xì)胞膜和細(xì)胞器膜，釋放胞內(nèi)蛋白，同時(shí)通過(guò)添加的抑制劑減少蛋白降解。以下描述如何配置RIPA裂解液：
一、準(zhǔn)備材料和設(shè)備
1. 材料：配置RIPA裂解液主要用到的材料包括，Tris-base、NaCl、NP-40(非離子型去垢劑)、去氧膽酸鈉、SDS(十二烷基硫酸鈉)、EDTA(解析鉛)、去離子水、蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑等。
2. 設(shè)備：配制所需的設(shè)備包括pH計(jì)、電子天平、磁力攪拌器以及各種量程的移液器和對(duì)應(yīng)的滅菌移液槍頭、容量瓶或燒杯用于配制和儲(chǔ)存裂解液、以及調(diào)整pH的鹽酸或氫氧化鈉溶液。
3. 防護(hù)用品：在配制過(guò)程中，操作者應(yīng)佩戴適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)室防護(hù)用品，如實(shí)驗(yàn)服、手套和護(hù)目鏡，以保障安全。
二、配制步驟
1. 溶解Tris-base和NaCl：使用電子天平稱取適量的Tris-base和NaCl，置于預(yù)定容量的容量瓶或燒杯中，并加入適量的去離子水。
2. 調(diào)整pH值：在磁力攪拌器的幫助下，攪拌至固體成分溶解。接著，利用pH計(jì)調(diào)整溶液的pH至7.4。通常這需要緩慢加入少量的鹽酸或氫氧化鈉溶液。
3. 添加去垢劑和鹽：繼續(xù)向溶液中加入規(guī)定量的NP-40(1%)、去氧膽酸鈉(0.5%)以及SDS(0.1%)。這些物質(zhì)幫助破裂細(xì)胞膜和細(xì)胞器膜，釋放出蛋白質(zhì)。
4. 加入抑制劑：為了保護(hù)釋放出的蛋白質(zhì)不被降解，需要添加蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑。這些抑制劑應(yīng)在使用前即時(shí)添加，以免長(zhǎng)時(shí)間放置導(dǎo)致失效。
5. 補(bǔ)水定容：將所有溶解后的成分?jǐn)嚢杈鶆?，之后使用去離子水補(bǔ)足至最終所需體積。
6. 混勻與保存：確保所有成分充分混勻后，RIPA裂解液就配制完成了。將裂解液分裝到干凈的容器中，通常存放于-20°C的環(huán)境中，避免反復(fù)凍融。
三、注意事項(xiàng)
1. 在使用RIPA裂解液提取蛋白之前，必須確認(rèn)樣品中不含有影響實(shí)驗(yàn)的污染物質(zhì)，且根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇適合的蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑。
2. 由于RIPA中的一些成分(如SDS和NP-40)具有一定的毒性，操作時(shí)需小心謹(jǐn)慎，并遵守實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)程。
3. RIPA裂解液一旦制備，其穩(wěn)定性隨時(shí)間和存儲(chǔ)條件變化，因此建議標(biāo)記配制日期，并在使用前檢查是否有沉淀或顏色變化。
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