詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 小鼠雜交瘤細(xì)胞;AE-2培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
品牌 懸浮生長(zhǎng)
特征特性 動(dòng)物用純化的人紅細(xì)胞乙酰膽堿脂酶免疫。 脾細(xì)胞與gp2/O-Agl4骨髓瘤細(xì)胞融合。 產(chǎn)生的抗體與人及猴的乙酰膽堿脂酶結(jié)合,但反應(yīng)位點(diǎn)與AE-1(ATCC HB-72)的抗原決定簇不同。 檢測(cè)發(fā)現(xiàn)短肢畸形(鼠痘)病毒陰性。
培養(yǎng)條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%
傳代方法 1:
2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。
傳代情況 PN
小鼠雜交瘤細(xì)胞;AE-2培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
小鼠雜交瘤細(xì)胞;AE-2培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長(zhǎng)至60%~70%融合時(shí),用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
Anti-N-ras/FITC 熒光素標(biāo)記原癌基因抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti- Beta-HCG/Gold 膠體金離子標(biāo)記小鼠抗人β亞基人絨毛膜促性腺激素單抗IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
CD19抗體 Anti-CD19 0.2ml
Goat Anti-Mouse IgM/Cy3 Cy3標(biāo)記的羊抗小鼠IgM 0.1ml
FLAD1 英文名稱: 黃素腺嘌呤二核苷酸抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh PLK5 絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶5抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti- Beta-HCG/Gold 膠體金離子標(biāo)記小鼠抗人β亞基人絨毛膜促性腺激素單抗IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Polycystin 1(Polycystic Kidney Disease 1) 多囊腎蛋白1抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anei-ATX 自分泌運(yùn)動(dòng)因子抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-AKT1(Thr34) 磷酸化蛋白激酶B抗體 規(guī)格 0.1ml
MMP-2 基質(zhì)金屬蛋白酶-2 濃縮液 0.1ml 進(jìn)口分裝
Unc5a 英文名稱: 神經(jīng)突起生長(zhǎng)誘導(dǎo)因子受體Unc5a抗體 0.2ml
DKK3 英文名稱: 抑癌蛋白DKK3抗體 0.1ml
Anei-ATX 自分泌運(yùn)動(dòng)因子抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
sVEGFR2 英文名稱: 可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2抗體 0.1ml
FGF19 英文名稱: 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子19抗體 0.2ml
L-組氨酸脫羧酶抗體 hu, mo, rat, bov, dog, pig, chi Anti-L-HDC 0.1ml
Anti-RASSF1A/FITC 熒光素標(biāo)記Ras相關(guān)區(qū)域家族1A抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-PLC beta3 (Ser537) 磷酸化磷酯酶Cβ3抗體 規(guī)格 0.1ml
APP695-770/APP17肽 (Amyloid protein precursor) 淀粉樣肽前體蛋白(17肽抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
小鼠雜交瘤細(xì)胞;AE-2培養(yǎng)HCCR-1(BRI3 binding protein) 人基因/bri3結(jié)合蛋白(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-CD/VECD 上皮型鈣粘附分子抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh PARD6B 缺陷性分配同源物β抗體 規(guī)格 0.2ml
BMP2 Kit Human 人 BMP-2 ELISA配對(duì)抗體 ELISA
TLR9 英文名稱: Toll樣受體9抗體 0.1ml
CDK5 英文名稱: 周期素依賴性激酶5抗體 0.1ml
Anti-CD/VECD 上皮型鈣粘附分子抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
小鼠雜交瘤細(xì)胞;AE-2培養(yǎng)懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。