詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 小鼠雜交瘤細(xì)胞;D47-u培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
品牌 半貼壁生長
特征特性 細(xì)胞注射小鼠腹腔可產(chǎn)生高滴度的單抗,可用于基礎(chǔ)研究和臨床檢驗(yàn)。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C5
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶 同工酶鑒定
染色體
使用權(quán)限 A類
小鼠雜交瘤細(xì)胞;D47-u培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時(shí),用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
小鼠雜交瘤細(xì)胞;D47-u培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
小鼠雜交瘤細(xì)胞;D47-u培養(yǎng)懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
Anti-phospho-ERK1(Thr197/Thr202) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化原活化蛋白激酶1/2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-Goat IgM/Gold 金標(biāo)記兔抗羊IgM (10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格: 2ml
成纖維細(xì)胞生長因子受體3抗體 Anti-FGFR3 0.1ml
Goat Anti-Mouse IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的羊抗小鼠IgG 0.1ml
FOXD2 英文名稱: 叉頭蛋白D2抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Stathmin (Ser16) 磷酸化原癌基因蛋白18抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Anti-Goat IgM/Gold 金標(biāo)記兔抗羊IgM (10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格: 2ml
PINP 人I型前膠原肽Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-phospho-c-Jun (Ser243) 磷酸化原癌基因c-Jun抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh NTCP/SLC10A1 鈉離子/磺膽酸共轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 規(guī)格 0.1ml
T4 Polynucleotide Kinase T4 DNA 激酶 1000 ul(1000次反應(yīng))
TIMP-1(NT) 英文名稱: 金屬蛋白酶組織抑制因子-1抗體(N端) 0.1ml
C8orf86 英文名稱: 8號染色體開放閱讀框86抗體 0.2ml
Anti-phospho-c-Jun (Ser243) 磷酸化原癌基因c-Jun抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
STK31 英文名稱: 絲酸/蘇酸蛋白激酶31抗體 0.2ml
phospho-Erk1 (Thr202 + Tyr204) 英文名稱: 磷酸化原活化蛋白激酶1抗體 0.1ml
超氧化物歧化酶2抗體 Anti-SOD2 0.2ml
Anti-TGF- Alpha /FITC 熒光素標(biāo)記轉(zhuǎn)移生長因子–α抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-MAPK8/MAPK9( Thr183+Tyr185) 磷酸化氨基末端激酶2抗體 規(guī)格 0.1ml
NGF-R(p75NTR) 神經(jīng)生長因子受體(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
小鼠雜交瘤細(xì)胞;D47-u培養(yǎng)Anti-Histone H1b/FITC 熒光素標(biāo)記抗組蛋白H1b抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-phospho-P53(pSer392)/FITC 熒光素標(biāo)記抗磷酸化抑制基因P53抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ATP7A 銅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白質(zhì)α鏈抗體 規(guī)格 0.1ml
BSA(標(biāo)準(zhǔn)) 血清白蛋白(標(biāo)準(zhǔn)) 1mg
GMPR2 英文名稱: 鳥苷酸還原酶2抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-mouse IgM/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗小鼠IgM 規(guī)格 0.1ml
Anti-phospho-P53(pSer392)/FITC 熒光素標(biāo)記抗磷酸化抑制基因P53抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml