詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞;NCI-H209培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮樣
品牌 懸浮聚集生長
特征特性 該細(xì)胞由Gazdar AF及其同事于1979年從一名小細(xì)胞肺癌患者的骨髓轉(zhuǎn)移灶中分離建立,該骨髓標(biāo)本的獲取先于患者的治療。該細(xì)胞是一種典型的小細(xì)胞性肺癌細(xì)胞,表達(dá)較高水平的4種生化標(biāo)志:
神經(jīng)特異性烯醇、肌酸激酶腦型同工酶、左旋多巴脫羧酶、鈴蟾肽樣免疫活性。c-myc DNA序列沒有擴增;未發(fā)現(xiàn)大的結(jié)構(gòu)DNA的異常;該細(xì)胞合成與正常肺相當(dāng)量的p53 mRNA。該細(xì)胞以聚集體的形式懸浮生長,只有聚集體中的細(xì)胞是有活力的,但是細(xì)胞活率無法估計,一般培養(yǎng)基中含有大量的細(xì)胞碎片。該細(xì)胞表達(dá)異常的RB1蛋白,其706
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 20%FBS
傳代方法 1:
2傳代;5~7天1次。
傳代情況 C5
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法(-)
STR Amelogenin:X,Y;CSF1PO:11;D13S317:11;D16S539:9,12;D18S51:13;D19S433:14.2,15;D21S11:32.2;D2S1338:17,20;D3S1358:18,20;D5S818:12;D7S820:9;D8S1179:12,13;FGA:20,24;TH01:7,9;TPOX:8;vWA:18,19;
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞;NCI-H209培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞;NCI-H209培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
Anti-Annexin V/PE 熒光素PE標(biāo)記兔抗人、大、小鼠、Annexin V抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
phospho-eIF4E(pSer209)(phospho-Eukaryotic translation initiation factor 4E) 磷酸化eIF-4E(Ser209)抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
磷酸化活化復(fù)制因子2抗體 Anti-phospho-ATF2 0.1ml
ZAN 英文名稱: 透明帶黏附蛋白ZAN抗體 0.2ml
DOCK1 英文名稱: 細(xì)胞質(zhì)分裂付出蛋白1抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh phospho-EIF4B (Ser540) 磷酸化真核翻譯起始因子4B抗體 規(guī)格 0.1ml
phospho-eIF4E(pSer209)(phospho-Eukaryotic translation initiation factor 4E) 磷酸化eIF-4E(Ser209)抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
TUBB(Human Beta-tubulin) ELISA kit 人β-微管蛋白Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-MARCKS 丙氨酸蛋白激酶C底物Marcks抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Ki-67 (Proliferation Marker) Ki67蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
TSH ELISA Kit 大鼠促甲狀腺素 96T
PGF2 alpha 英文名稱: 前列腺素F2a/PGF2 α抗體 0.2ml
C2orf60 英文名稱: 2號染色體開放閱讀框60抗體 0.2ml
Anti-MARCKS 丙氨酸蛋白激酶C底物Marcks抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
人β-1,3-半乳糖轉(zhuǎn)移酶2(β3GALT2)ELISA試劑盒人96T0.312-20 ng/mL小鼠免疫球蛋白A(IgA)ELISA試劑盒,英文名:IgA ELISA Kit大鼠β-位淀粉樣前體蛋白裂解酶2(βACE2)ELISA試劑盒,英文名:βACE2 ELISA Kit豚鼠降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)ELISA試劑盒,英文名:CGRP ELISA KiISA Kit for Human Serine--pyruvate aminotransferase小鼠胰島素(INS)ELISA試劑盒,英文名:INS ELISA KiISA Kit for Human Agrin小鼠絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酶(STK)ELISA試劑盒,英文名:STK ELISA KiISA Kit for Human Beta-1, 4-galactosyltransferase 5小鼠磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA試劑盒,英文名:P-PKC ELISA Kit人成纖維生長因子受體1(FGFR-1)ELISA試劑盒人96T31.2-2000 pg/mL小鼠凝血因子Ⅸ(F9)ELISA試劑盒,英文名:F9 ELISA Kit
人硫代嗎啉羧化物脫氫酶(CRYM) ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL小鼠花生四烯酸5脂氧合酶(Alox5)ELISA試劑盒,英文名:Alox5 ELISA KiISA Kit for Human Aspartate aminotransferase, mitochondrial小鼠解整合素金屬蛋白酶8(ADAM8)ELISA試劑盒,英文名:ADAM8 ELISA Kit人次黃嘌呤磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶1(HPRT1)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL小鼠胱天蛋白酶11(CASP11)ELISA試劑盒,英文名:CASP11 ELISA KiISA Kit for Human HDL-cholesterol小鼠端粒酶關(guān)聯(lián)蛋白1(TEP1)ELISA試劑盒,英文名:TEP1 ELISA Kit人干擾素α2(IFN-alpha-2)ELISA試劑盒人96T15.6-1000 pg/mL小鼠白細(xì)胞衍生趨化因子2(LECT2)ELISA試劑盒,英文名:LECT2 ELISA KiISA Kit for Human Insulin receptor小鼠Slit同源物2(Slit2)ELISA試劑盒,英文名:Slit2 ELISA Kit人α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒人96T7.8-500 pg/mL小鼠Ⅲ型前膠原氨基端原肽(PⅢNP)ELISA試劑盒,英文名:PⅢNP ELISA Kit
品名 規(guī)格 備注
phospho-ZFP36L1(Ser334) 英文名稱: 磷酸化鋅指蛋白36抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-CSF1R (Tyr723) 磷酸化巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體抗體 規(guī)格 0.1ml
GPR30(G Protein Coupled Receptor 30) G蛋白偶聯(lián)受體30抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
DeltaD 英文名稱: DeltaD抗體 0.2ml
PPM1A PPM1A / PP2C-alpha 鼠單抗 (PE) Human
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞;NCI-H209培養(yǎng)FSA(Human fetal sulfoslycoprotein antigen) ELISA Kit 人胚胎性硫糖蛋白抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-HHV8/ORF K2 類皰疹病毒8抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh MG 雞毒支原體抗體 規(guī)格 0.2ml
AC-1(Human adenylyl cyclase 1) ELISA Kit 人腺苷酸環(huán)化酶1 96T
REG1 beta 英文名稱: 胰島細(xì)胞再生因子β抗體 0.2ml
C5orf49 英文名稱: 5號染色體開放閱讀框49抗體 0.2ml
Anti-HHV8/ORF K2 類皰疹病毒8抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞;NCI-H209培養(yǎng)懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。