詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 人正常角膜上皮細(xì)胞;HNCEC/HL-008培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮樣
品牌 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 該細(xì)胞屬專保藏,其特征特性尚未公開(kāi)。
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS:
Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 未定
人正常角膜上皮細(xì)胞;HNCEC/HL-008培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開(kāi),吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長(zhǎng)至60%~70%融合時(shí),用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
人正常角膜上皮細(xì)胞;HNCEC/HL-008培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見(jiàn)細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮,然后分置其它無(wú)菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
人正常角膜上皮細(xì)胞;HNCEC/HL-008培養(yǎng)懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語(yǔ)的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過(guò)了遺傳改造。
Anti-GRB2/ASH /FITC 熒光素標(biāo)記生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-MAP3K8/TPL2/FITC 熒光素標(biāo)記原活化蛋白激酶激酶8抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh beta-Amyloid 1-40(CT) β淀粉樣肽1-40(C端)抗體 規(guī)格 0.1ml
H5N1-H5 H5亞型全病毒 1mg
C19orf38 英文名稱: 19號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框38抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rap2A Rap2A抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-MAP3K8/TPL2/FITC 熒光素標(biāo)記原活化蛋白激酶激酶8抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
VEGF-R1 人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-COMP/EPD1 軟骨寡聚基質(zhì)蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh n-Myc 致癌基因n-Myc抗體 規(guī)格 0.1ml
Human high mobility group protein 17,HMG-17 ELISA Kit 人高速泳動(dòng)蛋白17 96T
Thrombospondin 2 英文名稱: 血小板反應(yīng)蛋白2/凝血酶敏感蛋白2抗體 0.2ml
CRTAC1 英文名稱: 軟骨酸性蛋白1抗體 0.2ml
Anti-COMP/EPD1 軟骨寡聚基質(zhì)蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
人上皮細(xì)胞粘附分子(EPCAM)ELISA試劑盒人96T0.312-20 ng/mL小鼠吻素受體(KISS1R)ELISA試劑盒,英文名:KISS1R ELISA KiISA Kit for Melatonin大鼠信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子1(Smad1)ELISA試劑盒,英文名:Smad1 ELISA Kit人O6甲基鳥(niǎo)嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(MGMT)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL大鼠髓系細(xì)胞觸發(fā)受體-1(TREM-1)ELISA試劑盒,英文名:TREM-1 ELISA KiISA Kit for Human Amine oxidase [flavin-containing] A大鼠前列腺素D2(PGD2)ELISA試劑盒,英文名:PGD2 ELISA Kit人神經(jīng)連接蛋白4,X連鎖(Neuroligin X)ELISA試劑盒人96T0.312-20 ng/mL大鼠類風(fēng)濕因子(RF)ELISA試劑盒,英文名:RF ELISA KiISA Kit for Human N-alpha-acetyltransferase 20大鼠甲羥戊酸5-焦磷酸脫羧酶(MDD)ELISA試劑盒,英文名:MDD ELISA Kit人焦磷酸水解酶(PPA1)ELISA試劑盒人96T15.62-1000 pg/mL大鼠谷胱甘肽(GSH)ELISA試劑盒,英文名:GSH ELISA Kit
ELISA Kit for Human Ferritin light chain小鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3(NT3)ELISA試劑盒,英文名:NT3 ELISA KiISA Kit for Human Protein kinase C epsilon type大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白4(MCP-4)ELISA試劑盒,英文名:MCP-4 ELISA Kit人血小板激活因子乙酰水解酶2(PAFAH2)ELISA試劑盒人96T0.312-20 ng/mL大鼠白介素2(IL-2)ELISA試劑盒,英文名:IL-2 ELISA KiISA Kit for Human Phosphatidylinositol-glycan biosynthesis class F protein大鼠FMS樣酪氨酸激酶3(Flt3)ELISA試劑盒,英文名:Flt3 ELISA Kit人60S核糖體蛋白(60S ribosomal protein L13)ELISA試劑盒人96T0.625-40 ng/mL大鼠白細(xì)胞介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒,英文名:IL-1β ELISA KiISA Kit for Human Semenogelin-1大鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4(IGFBP4)ELISA試劑盒,英文名:IGFBP4 ELISA Kit人臂板蛋白-3B(SM/SEMA-3B)ELISA試劑盒人96T0.78-50 ng/mL大鼠胃泌素抑制肽(GIP)ELISA試劑盒,英文名:GIP ELISA Kit
兔抗人IgG-F(ab)2 0.5ml 國(guó)產(chǎn)
WD SOCS box protein 2 英文名稱: 信號(hào)傳導(dǎo)抑制蛋白WD重復(fù)蛋白2抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-CHEK1 (Ser296) 磷酸化細(xì)胞周期檢測(cè)點(diǎn)激酶1抗體 規(guī)格 0.1ml
HSP47(Heat shock protein-47) 熱休克蛋白-47抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Phospho-Dab1 (Tyr220) 英文名稱: 磷酸化Disabled 1抗體 0.1ml
Anti-phospho-c-Abl(Tyr245) 磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
人正常角膜上皮細(xì)胞;HNCEC/HL-008培養(yǎng)Anti-SSTR2 /FITC 熒光素標(biāo)記生長(zhǎng)抑素受體2(SSTR2)抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
MMP-1(matrix metalloproteinases-1) 基質(zhì)金屬蛋白酶-1(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
色素上皮源性因子抗體 Anti-PEDF 0.1ml
4EBP2 英文名稱: eIF4E結(jié)合蛋白2抗體 0.1ml
Estrogen Receptor alpha 英文名稱: 雌激素受體α抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Myt1(Ser83) 磷酸化髓鞘轉(zhuǎn)錄因子1抗體 規(guī)格 0.1ml
MMP-1(matrix metalloproteinases-1) 基質(zhì)金屬蛋白酶-1(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg