詳細(xì)介紹
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào);
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
PCR基本操作:?
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 分類 |
馬杜拉放線菌PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū) | Actinomadura maduraePCR | PCR檢測(cè)試劑盒 |
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對(duì)定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR
PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無(wú)放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
阿奇相關(guān)物質(zhì)H標(biāo)準(zhǔn)品 CAS: 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 15mg
阿奇相關(guān)物質(zhì)F標(biāo)準(zhǔn)品 CAS: 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 25mg
阿奇標(biāo)準(zhǔn)品 CAS: 117772-70-0 Azithromycin 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 100mg
阿奇標(biāo)準(zhǔn)品(定性用) CAS: 83905-01-5 Azithromycin Identity 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 75mg
阿奇德糖胺標(biāo)準(zhǔn)品 CAS: Desosaminylazithromycin 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 15mg
n-去阿奇標(biāo)準(zhǔn)品 CAS: N-Demethylazithromycin 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 15mg
阿奇-N-氧化物標(biāo)準(zhǔn)品 CAS: 90503-56-3 Azithromycin N-Oxide 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 15mg
偶氮-魯米特標(biāo)準(zhǔn)品 CAS: Azo-aminoglutethimide 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 100mg
U14(小鼠子細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 HPAC(人胰癌細(xì)胞)
CM-M007小鼠支氣管上皮細(xì)胞*培養(yǎng)100mL
RETN Others Mouse 小鼠 Resistin / ADSF / RETN 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
Ishikawa人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞 Human endomeial carcinoma cells Ishikawa RPMI-1640+10%FBS
IL12A & IL12B Protein Mouse 重組小鼠 IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋白
小鼠腎足突細(xì)胞*培養(yǎng) 100mL488-81-3高端化學(xué)試G原3(GAGE3)檢測(cè)試盒(酶免疫吸附試驗(yàn)法)
488-81-3高端化學(xué)試組(Php)檢測(cè)試盒(酶免疫吸附試驗(yàn)法)
488-81-3高端化學(xué)試Rabconnectin 3蛋白(RC3)檢測(cè)試盒(酶免疫吸附試驗(yàn)法)
59122-55-3高端化學(xué)試接觸蛋白6(CNTN6)檢測(cè)試盒(酶免疫吸附試驗(yàn)法)
59122-55-3高端化學(xué)試接觸蛋白5(CNTN5)檢測(cè)試盒(酶免疫吸附試驗(yàn)法)
69227-93-6高端化學(xué)試封閉蛋白19(CLDN19)檢測(cè)試盒(酶免疫吸附試驗(yàn)法)
69227-93-6高端化學(xué)試Codanin 1蛋白(CDAN1)檢測(cè)試盒(酶免疫吸附試驗(yàn)法)
126787-65-3高端化學(xué)試鈣結(jié)合蛋白3(CALB3)檢測(cè)試盒(酶免疫吸附試驗(yàn)法)
487-60-5高端化學(xué)試含鈣通道Flower域蛋白(CACFD1)檢測(cè)試盒(酶免疫吸附試驗(yàn)法)
35804-66-1高端化學(xué)試耦合因子6(CF6)檢測(cè)試盒(酶免疫吸附試驗(yàn)法)
馬杜拉放線菌PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。