詳細(xì)介紹
PCR基本操作:
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原理是由一對引物介導(dǎo),能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 分類 |
愛德華氏菌通用PCR檢測試劑盒說明書 | Edwardsiella spp.PCR | PCR檢測試劑盒 |
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR
愛德華氏菌通用PCR檢測試劑盒說明書PCR反應(yīng)特點
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
Phospho-SEK1/MKK4 (Ser257) 化絲裂原活化蛋白激酶激酶4體進(jìn)口/國產(chǎn)DQX1 DQX1蛋白體
Phospho-SEK1/MKK4 (Thr261) 化絲裂原活化蛋白激酶激酶4體進(jìn)口/國產(chǎn)DPP9/DPRP2 二肽肽酶9體
Phospho-SEK1/MKK4 (Ser257/Thr261) 化絲裂原活化蛋白激酶激酶4體進(jìn)口/國產(chǎn)DPP8/DPRP1 二肽肽酶8體
phospho-MEK5(Ser311+Thr315) 化絲裂原活化蛋白激酶激酶5體進(jìn)口/國產(chǎn)Matriptase 2 膜型絲蛋白酶2體
phospho-MEK5(Ser129) 化絲裂原活化蛋白激酶激酶5體進(jìn)口/國產(chǎn)CYBR1 細(xì)胞色B還原酶1體
MEK6 絲裂原活化蛋白激酶MKK6體進(jìn)口/國產(chǎn)UQCRC1 輔酶細(xì)胞色C還原酶核心蛋白1體
Phospho-MEK6 (Ser207) 化絲裂原活化蛋白激酶MKK6體進(jìn)口/國產(chǎn)TXNRD1 硫氧環(huán)蛋白還原酶1體Ninjurin 1英文名稱:LETM119號染色體開放閱讀框55體
Ninjurin 2英文名稱:LDHA19號染色體開放閱讀框56體
NEK3英文名稱:phospho-LKB1 (Thr363)19號染色體開放閱讀框57體
NEK2英文名稱:Laminin Beta 119號染色體開放閱讀框61體
Neurogranin英文名稱:LPLUNC119號染色體開放閱讀框77體
Neuropeptide S英文名稱:LIFR核DNA結(jié)合蛋白C1D體
Neuropeptide S英文名稱:lamin A + C1號染色體開放閱讀框58體
NPSR1英文名稱:Lamin B21號染色體開放閱讀框66體