詳細(xì)介紹
原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 分類 |
睡眠嗜血桿菌PCR檢測(cè)試劑盒進(jìn)口 | Haemophilus somnusPCR | PCR檢測(cè)試劑盒 |
PCR基本操作:
?
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào);
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對(duì)定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR
睡眠嗜血桿菌PCR檢測(cè)試劑盒進(jìn)口Oct-4B(OCT4B-190)NT 胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白190體(N端)進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)FRMD8 FRMD8蛋白體
ODC 鳥脫羧酶體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)CTDSPL CTDSPL蛋白體
OGG1/8 hydroxyguanine DNA glycosylase 8-羥鳥呤DNA糖化酶進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)CTDSPL2 CTDSPL2蛋白體
Omgp 少突細(xì)胞髓脂糖蛋白體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)CUEDC1 CUE結(jié)構(gòu)域蛋白1體
ompF(putative outer membrane porin F protein) 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏膜通道蛋白體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)CA XI/Carbonic Anhydrase XI 碳酐酶11體
OLFM1 嗅球蛋白1體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)Alpha casein α酪蛋白體
OPCML 阿樣物質(zhì)結(jié)合蛋白/細(xì)胞粘附分子樣蛋白體進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)CADM2/IGSF4D/Cell adhesion molecule 2 細(xì)胞粘附分子2PMPCB英文名稱:EDPF1CD4體
PRR15英文名稱:RNF62白細(xì)胞共同原體
protein C light chain英文名稱:MICB白細(xì)胞共同原體
protein C Activation peptide英文名稱:MLC1白細(xì)胞共同原體
PTEN英文名稱:Phospho-MKP1 (Ser359)間隙連接蛋白36體
PAFR英文名稱:Phospho-MKP1 (Ser296)12號(hào)染色體開放閱讀框61體
PP1C gamma英文名稱:MLK312號(hào)染色體開放閱讀框63體
p53R2英文名稱:Phospho-MLK3(Thr277 + Ser281)12號(hào)染色體開放閱讀框68體
PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無(wú)放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。