詳細(xì)介紹
原理是由一對引物介導(dǎo),能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 分類 |
牛分枝桿菌PCR檢測試劑盒說明書 | Mycobacterium bovisPCR | PCR檢測試劑盒 |
PCR基本操作:
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實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR
牛分枝桿菌PCR檢測試劑盒說明書Balsalazide Disodium20mg/支Snf1lk/SIK1 絲/蘇蛋白激酶SIK1體ELISA Kit for Cystatin 3 (CST3)
Balsalazide Related Compound A20mg/支CAMKK2 鈣調(diào)蛋白激酶激酶β體ELISA Kit for Cystatin 3 (CST3)
Balsalazide Related Compound B20mg/支IMPDH1 肌苷單脫酶1體ELISA Kit for Xeroderma Pigmentosum, Complementation Group C (XPC)
Beclomethasone Dipropionate20mg/支STK38 絲/蘇蛋白激酶38體ELISA Kit for Xeroderma Pigmentosum, Complementation Group C (XPC)
Behenoyl Polyoxylglycerides20mg/支Phospho-Bcr(Tyr360) 化T淋巴細(xì)胞受體體ELISA Kit for Osteopontin (OPN)
Bemotrizinol20mg/支MIRK/Dyrk1B 雙特異性酪化調(diào)節(jié)激酶1BELISA Kit for Osteopontin (OPN)
Bemotrizinol Impurity Mixture20mg/支KIST/UHMK1 絲/蘇蛋白激酶KIST體(激酶相互作用與白血病相關(guān)因)ELISA Kit for Osteopontin (OPN)
Benazepril Hydrochloride20mg/支NEK3 絲/蘇蛋白激酶Nek3體ELISA Kit for Osteopontin (OPN)Powdered Black Cohosh Extract48T/96T進(jìn)口、國產(chǎn)英文名稱16:20HPLC≥98%
Boswellia Serrata Extract48T/96T進(jìn)口、國產(chǎn)英文名稱16:20HPLC≥98%
48T/96T進(jìn)口、國產(chǎn)英文名稱16:20Powdered Bilberry ExtractHPLC≥98%
Boric Acid (AS)48T/96T進(jìn)口、國產(chǎn)英文名稱16:20Bile SaltsHPLC≥98%
Bretylium Tosylate48T/96T進(jìn)口、國產(chǎn)英文名稱16:20Positive BioreactionHPLC≥98%
Brinzolamide48T/96T進(jìn)口、國產(chǎn)英文名稱16:20BiotinHPLC≥95%
48T/96T進(jìn)口、國產(chǎn)英文名稱16:20BiperidenHPLC≥90%
PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。