詳細(xì)介紹
ELISA 試驗時,注意事項如下:
1. 正式試驗時,應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時本底較高,說明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2. 在ELISA中,進(jìn)行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質(zhì)包被適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值而蛋白量少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入 。
詳細(xì)參考數(shù)值:
產(chǎn)品名稱:晚期糖基化終末產(chǎn)物ELISA檢測試劑盒
英文名稱:advanced glycation end products
檢測范圍:0.75μg/mL~24μg/mL
貨號:YS-E97396
性狀:盒狀液體。
實驗方法:競爭法、一步法、夾心法、高敏法等。
作用范圍:科學(xué)研究。
樣品形式:血清血漿細(xì)胞培養(yǎng)上清其它生物液體
保質(zhì)期:6個月,本公司試劑盒系列產(chǎn)品均為**批次,請放心購買!
庫存信息: *√質(zhì)量保證√庫存充足√
引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有:
①標(biāo)本因素;
②試劑因素;
③操作因素。在實驗過程中請嚴(yán)格按照使用說明操作,必能得出準(zhǔn)確的實驗結(jié)果,可提供免費技術(shù)咨詢服務(wù)!
注意事項:
1加樣:
①實驗樣本過多時,可分批次操作,以減少實驗時間延長造成的誤差;
②加酶試劑后,用吸水紙吸干孔外試劑;
③作定量試驗時,使用加樣器加注試劑,并經(jīng)常校正其準(zhǔn)確性,此外,要做到一份樣本一個移液頭,防止交叉污染。
2.溫育:
①如有兩種溫度,盡量使用較低的溫育溫度、較長反應(yīng)時間的條件;
②用1個小溫度計放置在板孔反應(yīng)液中測量觀察;
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學(xué)梯度會造成“邊緣效應(yīng)”,因此盡量采用水??;
3.洗板:
①手工洗板時,拍板時要垂直,避免交叉污染,用力不能過猛,防止抗原抗體復(fù)合物脫離;
②洗板機洗板時應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢,若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出;
③為了洗滌效果好,實驗室可采用機器與人工洗滌相結(jié)合的方法,在機器洗滌后再進(jìn)行人工洗板1-2次,或適當(dāng)增加洗板的次數(shù);
4.顯色:
ELISA試劑盒中,如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物,則提供的底物為A和B兩瓶應(yīng)用液;如以鄰苯二胺(OPD)為底物,則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應(yīng)條件為37℃或室溫反應(yīng)15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑,要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光,但A、B液應(yīng)盡量避免接觸金屬器械。
5.判定:
讀取結(jié)果要在15-30 min內(nèi)完成,定性測定用肉眼判讀試驗結(jié)果時,反應(yīng)板應(yīng)水平距離白色背景10-15 cm;定量測定時用酶標(biāo)儀讀取結(jié)果,酶標(biāo)儀不應(yīng)置于陽光或強光照射下,需先預(yù)熱15-30 min再進(jìn)行測試。
優(yōu)點:
1、*抗體----高效、靈敏、特異
2、規(guī)范包被操作----吸附均勻,吸附性好,空白值低,孔底透明度高
3、良好的優(yōu)化方案----重復(fù)性高,可靠性強
4、購買本公司的ELISA試劑盒,免費代測
5、技術(shù)服務(wù)要求:專業(yè),規(guī)范,高效
6、適用于體液、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等多種類型的樣本
7、可檢測動物類型豐富:人、猴、大鼠、小鼠、豚鼠、黃金地鼠、兔、豬、犬、牛、綿羊、山羊、鵝、雞、蝦、河蟹、鱸魚、斑馬魚等
8、可檢測指標(biāo)齊全:炎癥因子、血管生成素、動脈粥樣硬化因子、趨化因子、生長因子基質(zhì)金屬蛋白酶、脂肪因子等等
9、經(jīng)濟、實惠、可靠,完善、穩(wěn)定的實驗體系,科研隊伍,良好的實驗設(shè)備、準(zhǔn)確可靠的實驗結(jié)果,是您可靠的合作伙伴。
1套 玻璃勻漿器,1 mL Glass Homogenizer 常溫保存
1瓶 DU-145細(xì)胞株 DU-145 低溫運輸和保存
5g 赤蘚紅 B 二鈉鹽 Erythrosin B Disodium Salt 室溫干燥避光保存
10g 葡聚糖 T-10 Dextran T-10 室溫保存
100U Therminator II DNA 聚合酶 Therminator II DNA Polymerase -20℃保存
50次 柱式BAC DNAout Column BAC DNAOUT 常溫保存(RNase A溶液4℃保存)
5次 96孔板血液DNAout(真空法) 96 Microwell Plate Blood DNAOUT 常溫
1 mg Fluo-3,五銨鹽 Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
100mL ADA Buffer,0.5M,pH7.4 ADA Buffer,0.5M,pH7.4 常溫保存
50T 牛白血病病毒PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存
250mL Sodium Phosphate Buffer(磷酸鈉緩沖液),0.5M,pH7.6 Sodium Phosphate Buffer,0.5M,pH7.6 常溫保存
15次 柱式動物線粒體DNAout,測序級 Column Animal mtDNAOUT(SG) 常溫
50次 柱式真菌RNAout Column Fungal RNAOUT 4℃保存
晚期糖基化終末產(chǎn)物ELISA檢測試劑盒1%NaCl蛋白胨水生化鑒定管 供耐氯化鈉的弧菌的靛基質(zhì)試驗用。 20支/盒
1%NaCl甘露醇生化鑒定管 用于鑒別耐氯化鈉的弧菌利用糖源的能力。(鑒定霍亂弧菌) 20支/盒
1%NaCl甘露糖 用于鑒別耐氯化鈉的弧菌利用糖源的能力。(鑒定霍亂弧菌) 20支/盒
1%NaCl肌醇生化鑒定管 用于鑒別耐氯化鈉的弧菌利用糖源的能力。(鑒定霍亂弧菌) 20支/盒
1%NaCl精氨酸雙水解酶生化鑒定管 用于鑒別耐氯化鈉的弧菌精氨酸氨基酸脫羧基形成胺使培養(yǎng)基變堿的能力。(鑒定霍亂弧菌) 20支/盒
1%NaCl精氨酸脫羧酶生化鑒定管 用于鑒別耐氯化鈉的弧菌鳥氨酸氨基酸脫羧基形成胺使培養(yǎng)基變堿的能力。 20支/盒
1%NaCl賴氨酸脫羧酶生化鑒定管 用于鑒別耐氯化鈉的弧菌賴氨酸氨基酸脫羧基形成胺使培養(yǎng)基變堿的能力。 20支/盒
1%NaCl鳥氨酸脫羧酶生化鑒定管 用于鑒別耐氯化鈉的弧菌鳥氨酸氨基酸脫羧基形成胺使培養(yǎng)基變堿的能力。 20支/盒
1%NaCl葡萄糖(產(chǎn)氣) 用于鑒別耐氯化鈉的弧菌利用糖源的能力。(鑒定霍亂弧菌) 20支/盒
1%NaCl水楊素生化鑒定管 用于鑒別耐氯化鈉的弧菌利用糖源的能力(鑒別霍亂弧菌) 20支/盒
1%NaCl西蒙氏杞櫞酸鹽生化鑒定管 用于鑒別耐氯化鈉的弧菌對杞櫞酸鹽和無機銨的利用能力。(鑒定霍亂弧菌) 20支/盒
1%NaCl蔗糖生化鑒定管 用于鑒別耐氯化鈉的弧菌利用糖源的能力。 20支/盒