詳細(xì)介紹
ELISA 試驗時,注意事項如下:
1. 正式試驗時,應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時本底較高,說明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2. 在ELISA中,進(jìn)行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質(zhì)包被適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值而蛋白量少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入 。
詳細(xì)參考數(shù)值:
產(chǎn)品名稱:幽門螺桿菌空泡毒素IgGELISA檢測試劑盒
英文名稱:Helicobacter pylori Vacuolating cytotoxin IgG
檢測范圍:6.25ng/ml~200ng/ml
貨號:YS-E98666
性狀:盒狀液體。
實驗方法:競爭法、一步法、夾心法、高敏法等。
作用范圍:科學(xué)研究。
樣品形式:血清血漿細(xì)胞培養(yǎng)上清其它生物液體
保質(zhì)期:6個月,本公司試劑盒系列產(chǎn)品均為**批次,請放心購買!
庫存信息: *√質(zhì)量保證√庫存充足√
引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有:
①標(biāo)本因素;
②試劑因素;
③操作因素。在實驗過程中請嚴(yán)格按照使用說明操作,必能得出準(zhǔn)確的實驗結(jié)果,可提供免費技術(shù)咨詢服務(wù)!
注意事項:
1加樣:
①實驗樣本過多時,可分批次操作,以減少實驗時間延長造成的誤差;
②加酶試劑后,用吸水紙吸干孔外試劑;
③作定量試驗時,使用加樣器加注試劑,并經(jīng)常校正其準(zhǔn)確性,此外,要做到一份樣本一個移液頭,防止交叉污染。
2.溫育:
①如有兩種溫度,盡量使用較低的溫育溫度、較長反應(yīng)時間的條件;
②用1個小溫度計放置在板孔反應(yīng)液中測量觀察;
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學(xué)梯度會造成“邊緣效應(yīng)”,因此盡量采用水??;
3.洗板:
①手工洗板時,拍板時要垂直,避免交叉污染,用力不能過猛,防止抗原抗體復(fù)合物脫離;
②洗板機洗板時應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢,若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出;
③為了洗滌效果好,實驗室可采用機器與人工洗滌相結(jié)合的方法,在機器洗滌后再進(jìn)行人工洗板1-2次,或適當(dāng)增加洗板的次數(shù);
4.顯色:
ELISA試劑盒中,如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物,則提供的底物為A和B兩瓶應(yīng)用液;如以鄰苯二胺(OPD)為底物,則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應(yīng)條件為37℃或室溫反應(yīng)15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑,要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光,但A、B液應(yīng)盡量避免接觸金屬器械。
5.判定:
讀取結(jié)果要在15-30 min內(nèi)完成,定性測定用肉眼判讀試驗結(jié)果時,反應(yīng)板應(yīng)水平距離白色背景10-15 cm;定量測定時用酶標(biāo)儀讀取結(jié)果,酶標(biāo)儀不應(yīng)置于陽光或強光照射下,需先預(yù)熱15-30 min再進(jìn)行測試。
優(yōu)點:
1、*抗體----高效、靈敏、特異
2、規(guī)范包被操作----吸附均勻,吸附性好,空白值低,孔底透明度高
3、良好的優(yōu)化方案----重復(fù)性高,可靠性強
4、購買本公司的ELISA試劑盒,免費代測
5、技術(shù)服務(wù)要求:專業(yè),規(guī)范,高效
6、適用于體液、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等多種類型的樣本
7、可檢測動物類型豐富:人、猴、大鼠、小鼠、豚鼠、地鼠、兔、豬、犬、牛、綿羊、山羊、鵝、雞、蝦、河蟹、鱸魚、斑馬魚等
8、可檢測指標(biāo)齊全:炎癥因子、血管生成素、動脈粥樣硬化因子、趨化因子、生長因子基質(zhì)金屬蛋白酶、脂肪因子等等
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CHURC1脊索生成素樣蛋白1抗體 CD5 ELISA Kit CD5分子(CD5)ELISA試劑盒
CRMP3神經(jīng)誘導(dǎo)胚胎發(fā)育相關(guān)蛋白Churchill抗體 CD4 ELISA Kit CD4分子(CD4)ELISA試劑盒
CRSP9二氫嘧啶酶相關(guān)蛋白3抗體 CD45 ELISA Kit CD45分子(CD45)ELISA試劑盒
Copine-6轉(zhuǎn)錄激活蛋白CRSP9抗體 CD44 ELISA Kit CD44分子(CD44)ELISA試劑盒
Cpt1c神經(jīng)網(wǎng)蛋白CopineVI抗體 CD44-v6 ELISA Kit CD44變體6(CD44-v6)ELISA試劑盒
Factor B腦型肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶1C抗體 CD40L ELISA Kit CD40配體(CD40L)ELISA試劑盒
CHRNA1補體因子B抗體 CD3 ELISA Kit CD3分子(CD3)ELISA試劑盒
CSFV Envelope glycoprotein E2乙酰膽堿受體前體蛋白AChRα1抗體 CD34 ELISA Kit CD34分子(CD34)ELISA試劑盒
CSDC2豬瘟病毒包膜糖蛋白E2抗體 CD30 ELISA Kit CD30分子(CD30)ELISA試劑盒
CA10冷休克結(jié)構(gòu)域蛋白C2抗體 CD22 ELISA Kit CD22分子(CD22)ELISA試劑盒
CD62L碳酸酐酶10抗體 CD209 ELISA Kit CD209分子(CD209)ELISA試劑盒
C-MycL選擇素抗體 CD19 ELISA Kit CD19分子(CD19)ELISA試劑盒
CCK8致癌基因C-Myc抗體 CD15 ELISA Kit CD15分子(CD15)ELISA試劑盒
E cadherin膽囊收縮素8抗體 CDl4 ELISA Kit CD14分子(CDl4)ELISA試劑盒
CITED1上皮鈣粘附分子抗體 CD147 ELISA Kit CD147分子(CD147)ELISA試劑盒
幽門螺桿菌空泡毒素IgGELISA檢測試劑盒馬來酸依那普利 英文名稱:Enalapril maleate 規(guī)格:30mg 保存:-20℃,避光
PRLR ProteinMouse重組小鼠 PRLR / Prolactin receptor 蛋白 (His 標(biāo)簽)
菌種保存和即用型運送培養(yǎng)基
胞嘧啶 英文名稱:Cytosine 規(guī)格:HPLC≥98% 20mg/支 保存:-20℃,避光
TGFBR2 ProteinHuman重組人 TGFBR2 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)
頭孢地尼 英文名稱:Cefdinir 規(guī)格:100mg 保存:-20℃,避光
異夏佛托苷、異夏佛塔苷 英文名稱:Isoschaftoside, isoschaftoside 規(guī)格:HPLC≥98% 20mg/支 保存:-20℃,避光
高山紅景天 英文名稱:Rhodiola sachalinensis 規(guī)格:2g 保存:-20℃,避光
HA ProteinInfluenza重組甲型流感 H1N1 (A/England/195/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 標(biāo)簽)
IL17A ProteinHuman重組人 IL17 / IL17A 蛋白
尼莫地平雜質(zhì)Ⅰ 英文名稱:Mestanolone 規(guī)格:50mg 保存:-20℃,避光
知母皂苷A3 英文名稱:Timosaponin A3 規(guī)格:HPLC≥98% 20mg/支 保存:-20℃,避光
THB Medium
乳糖肉湯250g用于食品中沙門氏菌檢驗前增菌