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          人外周血AFPmRNA表達(dá)水平PCR檢測(cè)試劑盒

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          更新時(shí)間:2023-03-18 14:03:41瀏覽次數(shù):259

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          產(chǎn)品簡(jiǎn)介

          供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50次
          應(yīng)用領(lǐng)域 生物產(chǎn)業(yè) 主要用途 僅供科研實(shí)驗(yàn)
          產(chǎn)品名稱 人外周血AFPmRNA表達(dá)水平PCR檢測(cè)試劑盒    
          人外周血AFPmRNA表達(dá)水平PCR檢測(cè)試劑盒公司正在出售的產(chǎn)品:LYVE-1淋巴管內(nèi)皮透明質(zhì)suan受體抗體phospho-MAPK3 (Tyr204)磷suan化絲裂原活化蛋白激mei3抗體SLC6A15碳suan氫鈉協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白6-A15抗體C1orf1951號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框195抗體DPP10二肽基肽mei10抗體

          詳細(xì)介紹

          組成及試劑配制:

          1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)

          2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。

          3、 樣品稀釋液:1×20ml。

          4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。

          產(chǎn)品名稱

          人外周血AFPmRNA表達(dá)水平PCR檢測(cè)試劑盒

          英文名稱


          規(guī)格

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          注意事項(xiàng):

          1.整個(gè)檢測(cè)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照本說(shuō)明書(shū)要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作,各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用,不能混用;實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作;三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。

          2.為避免RNA降解,樣本處理過(guò)程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè);樣本處理過(guò)程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過(guò)無(wú)核酶處理。

          3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照。

          4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時(shí)離心。

          5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽(yáng)性對(duì)照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨(dú)存放。

          6.為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。

          7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說(shuō)明書(shū)相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置;不同批號(hào)試劑不能混用。

          8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。

          9.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無(wú)害化處理后方可丟棄。

          PCR實(shí)驗(yàn)步驟:

          ①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其溶解。

          ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。

          ③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。

          ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。

          ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。

          ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。

          實(shí)驗(yàn)外包:

          1.基因組學(xué):基因芯片、SNP檢測(cè)、DNA甲基化檢測(cè)、生物信息學(xué)分析

          2.轉(zhuǎn)錄組學(xué):microRNA芯片、LncRNA芯片、表達(dá)譜芯片、RNA-seq

          3.蛋白質(zhì)組學(xué):2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM

          4.基因檢測(cè):DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR

          5.蛋白質(zhì)檢測(cè):Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫熒光、ELISA

          6.病理檢測(cè):HE染色、特殊染色、組織切片、免疫組化、流式細(xì)胞分選

          7.代謝組學(xué):GC-MS、LC-MS、NMR

          8.細(xì)胞及動(dòng)物模型:原代細(xì)胞、細(xì)胞模型、動(dòng)物模型構(gòu)建

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