詳細介紹
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
PCR基本操作:?
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 分類 |
單純皰疹病毒II型PCR檢測試劑盒說明書 | 50T | PCR檢測試劑盒 |
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR
PCR反應(yīng)特點
(1) 特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
BT-474(人導(dǎo)管細胞)釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
玫瑰紅鈉 質(zhì)量AR Rhodizonic acid sodium salt
紫芝 Ganoderma japonicum香菇 Lentinula edodes
靛藍二磺鈉 質(zhì)量AR Indigo carmine
COLO全細胞裂解液釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
百里藍鈉 質(zhì)量AR Bromothymol blue sodium salt
芽胞桿 Bacillus sp.CaCO2全細胞裂解液
變色鈉,鉻變二鈉 質(zhì)量AR Chromotropic acid disodium salt dihydrate
藍微褐鏈 Streptomyces cyaneofuscatus黃直絲鏈 Streptomyces flavorectus
特地游離 質(zhì)量>98%,BR Tedizolid free base
人皮膚成纖維樣細胞人卵巢細胞
特地;特地酯 質(zhì)量>99%;BR Tedizolid phosphate;TR-701FA
MM, 小鼠小膠質(zhì)細胞小鼠神經(jīng)干細胞
3--2-并噻腙,水合 質(zhì)量>98%,BR MBTH hydrochloride hydrate
異常漢遜酵母 Hansenula anomala異常漢遜酵母 Hansenula anomala
赤蘚紅;赤蘚紅B鈉 質(zhì)量BS Erythrosin B sodium saltLMO4英文名稱:HEXA載脂蛋白A1體
Lck/p56-LCK英文名稱:HECW1自噬相關(guān)蛋白16A體
CD85c英文名稱:HAAO化自噬相關(guān)蛋白4D體
LTB4-R1/BLTR英文名稱:HAP40化自噬相關(guān)蛋白4C體
LIR-6英文名稱:HIPPI化自噬相關(guān)蛋白7體
LAG-3/CD223英文名稱:HYPE化自噬相關(guān)蛋白16A體
LAIR-1英文名稱:Huntingtin化自噬相關(guān)蛋白9A體
Langerin/CD207英文名稱:HAP1化自噬相關(guān)蛋白4D體
單純皰疹病毒II型PCR檢測試劑盒說明書原理是由一對引物介導(dǎo),能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。