詳細介紹
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
PCR基本操作:?
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 分類 |
馬皰疹病毒1型PCR檢測試劑盒 供應商 | 50T | PCR檢測試劑盒 |
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。
主要服務:DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術:引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR
PCR反應特點
(1) 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。
羊肚 Morchella esculenta植物桿 Lactobacillus plantarum
葛根 質量HPLC≥98%,BR Puerarin
人小細胞肺根瘤 Rhizobium sp.
根皮苷(標準品) 質量HPLC≥98%,標準品 Phlorizin
地衣芽孢桿 Bacillus licheniformis熱帶假絲酵母 Candida tropicalis
根皮(標準品) 質量HPLC≥98%,標準品 Phloretin
PC-12(高分化),PC12,大鼠腎上髓質嗜鉻瘤分化細胞株(高分化)大鼠腸平滑肌細胞*培養(yǎng)
根皮苷 質量HPLC≥98%,BR Phlorizin
大豆慢生根瘤 Bradyrhizobium japonicum猴
根皮 質量>97%,BR Phloretin
Caov-3(人突狀卵巢細胞)去
鉤藤(標準品) 質量HPLC≥98%,標準品 Rhyncholphylline
爪哇根 Rhizopus javanicus大鼠卵巢顆粒細胞*培養(yǎng)
β-谷甾 質量HPLC≥98%,標準品 β-Sitosterol
運動發(fā)酵單胞 Zymomonas mobilis釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
光甘草定 質量HPLC≥98%,標準品 GlabridinNSP3英文名稱:Manic Fringe化β-連環(huán)蛋白/β-連環(huán)/β鏈接體
Neuritin英文名稱:Mib1化β-連環(huán)蛋白/β-連環(huán)/β鏈接體
NPIP-like protein 1英文名稱:MAML1化β-連環(huán)蛋白/β-連環(huán)/β鏈接體
Nicastrin英文名稱:MAML2化β-連環(huán)蛋白/β-連環(huán)/β鏈接體
NARC1英文名稱:MAPK6βA3/A1-crystallin蛋白體
NPFF1 Receptor英文名稱:phospho-MST4 + MST3 + STK25 (Thr178 + Thr190 + Thr174)γS-crystallin蛋白體
Nur77英文名稱:MEGF101號染色體開放閱讀框85體
Phospho-Nur77(Ser351)英文名稱:MPP41號染色體開放閱讀框87體
馬皰疹病毒1型PCR檢測試劑盒 供應商原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。