詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞;K7M2wt[K7M2-WT]培養(yǎng)
形態(tài)特性
品牌 貼壁生長
特征特性 抗原表達(dá): CD31 陽性 [PubMed:1315100] 產(chǎn)物: 八因子 [PubMed: 11315100]; 整合唾液酸蛋白 (BSP) [PubMed11315100]; biglyan [PubMed: 11315100]; decorrin [PubMed:1315100]; villin 2 (ezrin) [PubMed: 11325848]. 骨唾液酸蛋白, biglyan, decorrin, 和 osteopontin 的表達(dá)顯示其骨家族細(xì)胞特
小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞;K7M2wt[K7M2-WT]培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞;K7M2wt[K7M2-WT]培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
Anti-PARP/FITC 熒光素標(biāo)記多腺苷二磷酸多聚酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-human IgA/FITC 熒光素標(biāo)記羊抗人IgAMulti-class antibodies規(guī)格: 0.3ml
人巨細(xì)胞病毒PP65/CMV低基質(zhì)磷脂蛋白抗體 Anti-anti-HCMV PP65/HHV5 PP65 0.1ml
Rabbit Anti-mouse IgG-Fc/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的兔抗小鼠IgG-Fc 0.1ml
FMNL1 英文名稱: 成蛋白相關(guān)蛋白1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Tuberin/TSC2(Ser1418) 磷酸化結(jié)節(jié)性硬化蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
Goat Anti-human IgA/FITC 熒光素標(biāo)記羊抗人IgAMulti-class antibodies規(guī)格: 0.3ml
Plant Vitamin A,VA ELISA Kit 植物維生素AMulti-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-DMBT1 /FITC 熒光素標(biāo)記抑癌基因抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Cyclin B3 周期素B3抗體 規(guī)格 0.2ml
BSA/Cy5 熒光素Cy5標(biāo)記血清白蛋白 0.1ml
KCNH1 英文名稱: 鉀離子通道蛋白EAG1抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh WISP39/FKBPL p21調(diào)控蛋白WISP39抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-DMBT1 /FITC 熒光素標(biāo)記抑癌基因抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Styk1 英文名稱: 絲酸/蘇酸/酪酸激酶STYK1抗體 0.2ml
Phospho-Estrogen Receptor alpha (Ser167) 英文名稱: 磷酸化雌激素受體ER alpha 抗體 0.1ml
src原癌基因抗體 Anti-SRC 0.2ml
Anti-Tie2/FITC 熒光素標(biāo)記上皮生長因子樣域酪氨酸激酶2IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-MAP4(Ser1046) 磷酸化微管相關(guān)蛋白4抗體 規(guī)格 0.1ml
ATF6(activating transcription factor 6) 活化轉(zhuǎn)錄因子6抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞;K7M2wt[K7M2-WT]培養(yǎng)IL-1 Beta (Rabbit Interleukin 1 Beta) ELISA Kit 兔白介素1βMulti-class antibodies規(guī)格: 96T
Anti-CXCL5/ENA-78/FITC 熒光素標(biāo)記上皮中性粒細(xì)胞活化肽78抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh DcR1 壞死因子配體超家族成員10C 規(guī)格 0.1ml
Bovine IgG/APC 熒光素APC標(biāo)記IgG 0.1ml
Leptin 英文名稱: 瘦素抗體 0.1ml
沙丁胺醇單克隆抗體 小鼠單抗 0.2
Anti-CXCL5/ENA-78/FITC 熒光素標(biāo)記上皮中性粒細(xì)胞活化肽78抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞;K7M2wt[K7M2-WT]培養(yǎng)懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。