詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 小鼠骨髓瘤細(xì)胞;P3X63-Ag8培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞
品牌 半貼壁生長
特征特性 這株細(xì)胞源自P3K細(xì)胞株(源自漿細(xì)胞MOPC-21的組織培養(yǎng)株)。 能抗0.1 mM 8-氮雜鳥嘌呤但在HAT培養(yǎng)基中死亡。 據(jù)報道它是由于缺失了3-酮類固醇還原酶活性的膽固醇營養(yǎng)缺陷型。 檢測表明肢骨發(fā)育畸形病毒(鼠痘)陰性。
培養(yǎng)條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%
傳代方法 1:
2。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況
小鼠骨髓瘤細(xì)胞;P3X63-Ag8培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
Anti-RhoC /FITC 熒光素標(biāo)記RhoC抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Galanin 神經(jīng)節(jié)肽(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
原活化蛋白激酶激酶2抗體 Anti-MAPKK2 0.1ml
phospho-SOX9(Ser181) 英文名稱: 磷酸化轉(zhuǎn)錄因子SOX9蛋白抗體 0.1ml
Flightless 1 英文名稱: 凝溶膠蛋白家族Fli-1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-PIK3R2(Tyr467) 磷酸化磷脂酰肌醇激酶p85β抗體 規(guī)格 0.1ml
Galanin 神經(jīng)節(jié)肽(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
PLP(Human proteolipid protein) ELISA Kit 人蛋白脂質(zhì)蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-phospho-CSF1R(Tyr923) 磷酸化巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh JMY 連接介導(dǎo)調(diào)節(jié)蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
sEPCR ELISA Kit 大鼠可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體 96T
PHD2 英文名稱: 脯酸羥化酶2抗體 0.1ml
C3ORF31 英文名稱: 3號染色體開放閱讀框31抗體 0.2ml
Anti-phospho-CSF1R(Tyr923) 磷酸化巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Survivin 細(xì)胞凋亡抑制因子的一種(抗原) 0.5mg
phospho-c-Jun(Tyr170) 英文名稱: 磷酸化原癌基因c-Jun抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Collagen II/Chondrocalcin Ⅱ型膠原α1蛋白/軟骨鈣素抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti-APPL1/FITC 熒光素標(biāo)記抗銜接因子蛋白含pH域磷酸酪氨酸結(jié)合域和亮氨酸拉鏈基元1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh TSSC3 抑制轉(zhuǎn)移候選基因3抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-FLIPS/FITC 熒光素標(biāo)記凋亡調(diào)節(jié)基因之一抗體(短型)IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
MOG ELISA Kit (human) 抗髓鞘少樹突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白(人)Multi-class antibodies規(guī)格: 96T
Anti-IL-21R 白介素21受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh LRRTM1 富含亮氨酸重復(fù)跨膜神經(jīng)元蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml
BMP-6(Human Bone Morphogenetic Protein 6) ELISA Kit 人骨形成蛋白6 96T
phospho-ROCK2(Thr249) 英文名稱: 磷酸化Rho相關(guān)蛋白激酶2抗體 0.1ml
phospho-c-kit(Tyr936) 英文名稱: 磷酸化原癌基因c-kit抗體 0.1ml
Anti-IL-21R 白介素21受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。