詳細(xì)介紹
小鼠網(wǎng)織細(xì)胞性白血病細(xì)胞;L615價(jià)格懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
細(xì)胞名稱 小鼠網(wǎng)織細(xì)胞性白血病細(xì)胞;L615價(jià)格
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
品牌 懸浮生長(zhǎng)
特征特性 L6565細(xì)胞源自L6565白血病小鼠的脾細(xì)胞胰懸液。染色體數(shù)從38到144不等。電鏡觀察證明L6565克隆細(xì)胞核邊界清晰,細(xì)胞質(zhì)中oragnalles和A類C類病毒顆粒豐富。 c-myc和c-fos過量表達(dá)。 L6565細(xì)胞克隆是一株含有RNA病毒的淋巴細(xì)胞白血病干細(xì)胞。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%
傳代方法 1:
2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。
傳代情況 PN
凍存條件 *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測(cè) 陰
貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長(zhǎng)至60%~70%融合時(shí),用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
Anti-Sema3A/FITC 熒光素標(biāo)記臂板蛋白3A抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Actin Alpha /Alpha-SMA (Actin alpha , smooth muscle aorta) 肌動(dòng)蛋白(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
胃粘液素抗體 anti-MUC5AC/Mucin 5AC 0.1ml
STAC 英文名稱: STAC1蛋白抗體 0.2ml
FLG 英文名稱: 絲聚合蛋白/中間絲蛋白抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Paxillin(Ser83) 磷酸化樁蛋白Paxillin抗體 規(guī)格 0.1ml
Actin Alpha /Alpha-SMA (Actin alpha , smooth muscle aorta) 肌動(dòng)蛋白(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
pMHC(Human peptide major histocompatibility complex) ELISA Kit 人肽-主要組織相容性復(fù)合體復(fù)合物Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-secretory IgA 分泌型免疫球蛋白A抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh H1N1 Matrix Protein 2/Influenza A bp1 A型豬流感病毒H1N1-M2蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
Y-GT(Rat) ELISA Kit 大鼠Y-谷酰轉(zhuǎn)肽酶 96T
OAT-3 英文名稱: 陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-3抗體 0.1ml
BOLA1 英文名稱: BOLA1蛋白抗體 0.2ml
Anti-secretory IgA 分泌型免疫球蛋白A抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
SV2A 英文名稱: 突觸泡蛋白2A抗體 0.2ml
FREAC3 英文名稱: 叉頭相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子3抗體 0.1ml
瘦素抗體 Anti-Leptin 0.2ml
anti-RAP1A/FITC 熒光素標(biāo)記抗Rap1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-PLC gamma 2 (Tyr759) 磷酸化磷酯酶Cγ2抗體 規(guī)格 0.1ml
Beta-Amyloid (1-42) β淀粉樣肽(1-42)(多肽蛋白)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1mg
IL-6 ELISA KIT 大鼠白介素6Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Phospho-Bad(Ser112) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ETS1 associated protein II/EAPII ETS1相關(guān)蛋白2抗體 規(guī)格 0.1ml
BMP-4(Mouse Bone morphogenetic protein 4) ELISA Kit 小鼠骨成型蛋白4 96T
Phospho-MYPT1 (Ser668) 英文名稱: 磷酸化肌球蛋白磷酸酶抗體 0.1ml
AT2R 英文名稱: 血管緊張素Ⅱ受體1抗體 0.1ml
Anti-Phospho-Bad(Ser112) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml