詳細(xì)介紹
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;Psi2DAP培養(yǎng)懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
細(xì)胞名稱 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;Psi2DAP培養(yǎng)
形態(tài)特性 成纖維細(xì)胞
品牌 貼壁生長
特征特性 這株細(xì)胞生成一種可以感染小鼠細(xì)胞的載體。 Psi2 DAP細(xì)胞生成的載體編碼了人類胎盤堿性磷酸酯酶基因和新霉素抗性基因。 這株細(xì)胞通過Psi2細(xì)胞插入一個重組的逆轉(zhuǎn)錄病毒(DAP)基因組衍生而來。 被這種Psi2 DAP產(chǎn)生的載體感染的細(xì)胞表達(dá)的磷酸酯酶可用組織化學(xué)方法檢測,可以用作體內(nèi)追蹤他們命運的標(biāo)記。 這些細(xì)胞也可能產(chǎn)生輔助病毒。 檢測輔助病毒的方法或其他逆轉(zhuǎn)錄病毒技術(shù),請參考Cepko, C.L. Lineage analysis and immor
貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
Anti-RANK/TNFRSF11A/CD265/FITC 熒光素標(biāo)記核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-rat IgG/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗大鼠IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
嗜鉻粒素A抗體 Anti-CGA 0.2ml
Rabbit Anti-horse IgM/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗馬IgM 0.1ml
Fibulin 1 英文名稱: “衰老關(guān)鍵蛋白”抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh PKC beta 1/2 蛋白激酶C beta 1/2抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Anti-rat IgG/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗大鼠IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
PR(Progestogerone receptor)Human 人孕激素受體Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Claudin 4 緊密連接蛋白4抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh NOC3L/FAD24 脂肪細(xì)胞分化因子24 規(guī)格 0.2ml
Human Beta Lactoglobulin, Beta-Lg ELISA Kit 人β乳球蛋白 96T
TUBA1C 英文名稱: 微管相關(guān)蛋白α6抗體 0.1ml
C1orf112 英文名稱: 1號染色體開放閱讀框112抗體 0.2ml
Anti-Claudin 4 緊密連接蛋白4抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Syntenin 2 英文名稱: 多配體聚糖結(jié)合蛋白2抗體 0.2ml
PHC1 英文名稱: 早期發(fā)育調(diào)控蛋白1抗體 0.2ml
增殖細(xì)胞核抗原抗體 Anti-PCNA 0.1ml
Anti-SRG5/SPATA12/FITC 熒光素標(biāo)記發(fā)生相關(guān)基因5抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-NF1(Ser2515) 磷酸化1型神經(jīng)纖維瘤抗體 規(guī)格 0.1ml
fgL2 (Fibrinogen-like 2) 凝血酶原酶 (又稱:纖維介素蛋白;前凝血素)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
BetaGAL(Human Alpha-galactosidase) ELISA Kit 人β半乳糖苷酶Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-NKA 神經(jīng)激肽A抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh IL-13Ra1 白細(xì)胞介素-13受體a1抗體 規(guī)格 0.1ml
BGP/Gehrelin(Mouse brain-gut peptides) ELISA Kit 小鼠腦腸肽 96T
phospho-PARK2(Ser101) 英文名稱: 磷酸化帕金蛋白抗體 0.1ml
Complement C3 英文名稱: 補體C3a過敏毒素抗體 0.1ml
Anti-NKA 神經(jīng)激肽A抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml