詳細介紹
小鼠胚胎成纖維細胞;3T3-Swissalbino價格懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。
細胞名稱 小鼠胚胎成纖維細胞;3T3-Swissalbino價格
形態(tài)特性 成纖維細胞
品牌 貼壁生長
特征特性 3T3 細胞株1962年從分解的瑞士小鼠胚胎中建立。 這株細胞是接觸抑制的。 一個長滿的單層產(chǎn)量是40000細胞/平方厘米。測試發(fā)現(xiàn)肢骨發(fā)育畸形病毒(鼠痘)陰性。 細胞應長在塑料瓶中,在一些玻璃表面上可能長不好。 飽和密度可以達到約50000細胞/平方厘米。
培養(yǎng)條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 胎牛血清,10%
傳代方法 消化3-5分
貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或實驗。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細胞生長曲線
Anti-Phospho-PEA15 (Ser116) /FITC 熒光素標記磷酸化星形膠質細胞PEA15抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-Bovine IgM/Gold 金標記羊抗IgM(10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格: 2ml
酪氨酸蛋白激酶受體B2抗體 Anti-EphB2 R 0.1ml
Donkey Anti-Guinea pig IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標記的驢抗豚鼠IgG 0.1ml
Fibrillin 1 英文名稱: 原纖維蛋白1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-Tau protein(Ser422) 磷酸化微管相關蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
Goat Anti-Bovine IgM/Gold 金標記羊抗IgM(10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格: 2ml
PRL ELISA Kit 大鼠催乳素Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-AT/AGT /FITC 熒光素標記血管緊張素原抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh FAK2/PYK2 富含脯氨酸的酪氨酸激酶2抗體 規(guī)格 0.1ml
CXCL16(Human CXC-chemokine ligand 16) ELISA Kit 人CXC趨化因子配體16 96T
MMP-1 英文名稱: 基質金屬蛋白酶-1抗體 0.1ml
AGPAT5 英文名稱: 溶血磷脂?;D移酶5抗體 0.2ml
Anti-AT/AGT /FITC 熒光素標記血管緊張素原抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
T lymphocyte subset kit (SAP) T淋巴細胞亞群檢測盒(SAP法) 100人份
TCF9 英文名稱: 轉錄因子9抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh NQO1 醌氧化還原酶抗體 規(guī)格 0.1ml
BMP-9 Human 人骨成型蛋白-9Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
C7orf30 英文名稱: 7號染色體開放閱讀框30抗體 0.2ml
Anti-CLCA4 鈣激活氯離子通道4抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
FFA(Human free fatty acids) ELISA Kit 人游離脂肪酸Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Microsporidia protien 蜜蜂微孢子蟲蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh IRX4 Iroquois同源蛋白4抗體 規(guī)格 0.2ml
bFGF-6 ELISA Kit 大鼠堿性成纖維細胞生長因子6 96T
PCDHGC3 英文名稱: 原鈣粘蛋白γC3抗體 0.2ml
C20orf152 英文名稱: 20號染色體開放閱讀框152抗體 0.2ml
Anti-Microsporidia protien 蜜蜂微孢子蟲蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml