詳細(xì)介紹
小鼠抗人IgE雜交瘤細(xì)胞;mAbhIgE-501價格懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
細(xì)胞名稱 小鼠抗人IgE雜交瘤細(xì)胞;mAbhIgE-501價格
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
品牌 半貼壁生長
特征特性
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 保持細(xì)胞密度在1×105~1×106 cells/ml之間,每周換液2~3次
傳代情況
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法(-)
STR -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
Anti-Phospho-eNOS (Thr495)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化一氧化氮合成酶3抗體(內(nèi)皮型)IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-ZO-1/FITC 熒光素標(biāo)記胞質(zhì)緊密粘連蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
半胱氨酸蛋白酶8抗體 Anti-Caspase-8 0.1ml
Goat Anti-Guinea pig IgG/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG 0.1ml
FBXW8 英文名稱: FBXW8蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Pol II/RNA polymerase II RNA聚合酶II抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-ZO-1/FITC 熒光素標(biāo)記胞質(zhì)緊密粘連蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
RANKL (Rabbit receptor activator of nuclear factor kappa B ligand) ELISA Kit 兔核因子κB受體活化因子配基Multi-class antibodies規(guī)格: 96T
Anti-CXorf36/FITC 熒光素標(biāo)記脫羧酶蛋白體36抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh DATF1 死亡相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子1抗體 規(guī)格 0.2ml
Horse IgG/PE 熒光素PE標(biāo)記馬IgG 0.1ml
Langerin/CD207 英文名稱: 白細(xì)胞分化抗原CD207抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Zyxin/ESP 2 斑聯(lián)蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-CXorf36/FITC 熒光素標(biāo)記脫羧酶蛋白體36抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
TFPI(Mouse Tissue factor pathway inhibitor) ELISA Kit 小鼠組織因子途徑抑制物 96T
Nucleostemin 英文名稱: 核干細(xì)胞因子抗體(鳥嘌呤核苷酸結(jié)合蛋白3) 0.1ml
Rhesus antibody Rh Goat Anti-rabbit IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的羊抗兔IgG 規(guī)格 0.1ml
Human cytovillin/ezrin,CVL ELISA Kit 人細(xì)胞絨毛蛋白/埃茲蛋白Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
hCG beta 英文名稱: 人β亞基人絨毛膜促性腺激素(β HCG)抗體 0.1ml
Anti-Phospho-Smad2 (Ser245/250/255) 磷酸化細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rat Caspase-9 大鼠Caspase-9Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-phospho-Ephrin B (Tyr331) 磷酸化Ephrin B抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh MUC13 粘蛋白13抗體 規(guī)格 0.2ml
BCR(Human B cell receptor) ELISA Kit 人B細(xì)胞受體 96T
SCN2A 英文名稱: SCN2A抗體 0.1ml
C4orf34 英文名稱: 4號染色體開放閱讀框34抗體 0.2ml
Anti-phospho-Ephrin B (Tyr331) 磷酸化Ephrin B抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml