詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 小鼠樹突狀細(xì)胞肉瘤細(xì)胞;DCS培養(yǎng)
形態(tài)特性 梭形,胞突呈分枝狀,常有大小粗細(xì)不等的胞突
品牌 貼壁生長
特征特性 LⅡ瘤株在615小鼠皮下移植后,取脾臟原代培養(yǎng),傳20代后鑒定:
細(xì)胞呈多角形、梭形及不規(guī)則形,胞突呈分枝狀,常有大小粗細(xì)不等的胞突;經(jīng)鑒定證明是小鼠樹突狀肉瘤細(xì)胞;615小鼠皮下移植100%成瘤。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%CS
傳代方法 1:3~1:6傳代;2~3天1次。
傳代情況 P22
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法(-)
STR -
同工酶
染色體 70~80
使用權(quán)限 A類
小鼠樹突狀細(xì)胞肉瘤細(xì)胞;DCS培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
ANti-PDCD4/FITC 熒光素標(biāo)記凋亡相關(guān)蛋白4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-pig IgG/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗豬IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.3ml
抑癌基因抗體 Anti-DMBT1 1ml
Rabbit Anti-human IgG/FITC FITC標(biāo)記的兔抗人IgG 0.3ml
FAM83F 英文名稱: FAM83F蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-TRADD(Ser299) 磷酸化壞死因子受體1相關(guān)死亡域蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Anti-pig IgG/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗豬IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.3ml
S6PDH(NADP sorbitol-6-phosphate dehydrogenase) 6-磷酸山梨醇脫氫酶抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-Bcl-6/5 原癌基因Bcl-6抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phgophs-ATG4C(Ser177) 磷酸化自噬相關(guān)蛋白4C抗體 規(guī)格 0.1ml
Inhibin,alpha 濃縮液 0.1ml 進(jìn)口分裝
Ubiquitin 英文名稱: 泛素蛋白抗體 0.1ml
Complement C4 gamma chain 英文名稱: 補(bǔ)體C4 γ 鏈蛋白抗體 0.1ml
Anti-Bcl-6/5 原癌基因Bcl-6抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
TM(Thrombomodulin) 血栓調(diào)節(jié)蛋白多肽 0.5mg
IL-10 英文名稱: 白細(xì)胞介素10抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh CEP97 中心體蛋白97kDa抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-Caspase-12(hunman)/FITC 熒光素標(biāo)記半胱胺酸蛋白酶蛋白-12抗體(人)IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh TLK2 絲氨酸/蘇氨酸激酶TLK2抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti- Alpha-HCG/FITC 熒光素標(biāo)記α亞基人絨毛膜促性腺激素抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
ADA(Human adenosine deaminase) ELISA Kit 人腺苷脫氨酶Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-NF-L/68kDa neurofilament 低分子量神經(jīng)絲蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh IL-17RC/IL-17RL 白介素17受體C抗體 規(guī)格 0.1ml
ATGA/TGAB(Human Anti-Thyroid Microsome Antibody) ELISA KIT 人抗甲狀腺球蛋白抗體 96T
PCNA-Proliferation Marker 英文名稱: 增殖細(xì)胞核抗原抗體 0.1ml
CD63 英文名稱: 黑色素瘤相關(guān)抗原抗體 0.1ml
Anti-NF-L/68kDa neurofilament 低分子量神經(jīng)絲蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml